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Milieux et caracterisation microbienne

TP DE MICROBIOLOGIE - ANNEE - Licence Sciences Technologies Santé mention Biologie UE b Bactériologie et Virologie Générales page MATERIEL - une blouse en coton - un feutre indélébile - un élastique à cheveux Travail en binôme Etuve groupe du matin étage du haut groupe de l ? après midi étage du bas Pipetage uniquement avec poires ère semaine PROGRAMME DU TP LE COURS ET LES TD DOIVENT ETRE COMPRIS Travail stérile Identi ?cation de souches Identi ?cation présomptive de souches d ? un mélange Techniques de base Travail stérile Ensemencement Etat frais Isolement sur milieux gélosés sélectifs et non sélectifs Coloration de Gram Identi ?cation bactérienne par l ? étude des caractères métaboliques et antigéniques I - TRAVAIL STERILE J J J A partir d ? un bouillon Trypticase Soja TS de mL tube à essai transvaser stérilement ?? mL dans tubes à hémolyse à l ? aide d ? une pipette Pasteur bouillons serviront au test de stérilité les incuber h à C - les autres bouillons serviront pour l ? identi ?cation des souches voir II J Les bouillons non ensemencés sont-ils limpides Conclusion II - IDENTIFICATION DE SOUCHES J J J Chaque binôme reçoit souches isolées sur gélose TS en vue d ? une identi ?cation J Caractères morphologiques Pour chacune des souches réaliser séparément - Gram objectif x à l ? immersion Dessiner la forme exacte allongée ovale ronde incurvée ? Préciser le groupement - Etude de la mobilité ensemencement d ? un milieu semi-solide mannitol-mobilité piqûre centrale avec colonie - ensemencement d ? un bouillon TS de ? mL avec colonie ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? Réisolement - Faire sécher géloses TS min à l ? étuve - Isoler à partir du bouillon TS ensemencé par colonie chaque souche sur une gélose TS par la méthode des quadrants Flamber entre chaque quadrant Semaine C J Etudier sur les souches Caractères morphologiques - étude de la mobilité - lecture du milieu mannitol-mobilité - état frais entre lame et lamelle à partir du bouillon TS objectif x à sec - étude macroscopique des colonies Métabolisme énergétique TESTS à REALISER SUR LA MEME LAME - catalase Déposer goutte de H O puis les colonies avec pipette Pasteur oxydase Déposer papier buvard avec goutte de TMPD Déposer les colonies avec une pipette Pasteur à la limite de la goutte et du buvard sec Le test est si c ? est la colonie qui vire qu rouge Etudier selon l ? identi ?cation présomptive de la famille ou du genre Caractères métaboliques - pour bacilles Gram - Lecture de la fermentation du mannitol sur le milieu mannitol-mobilité ensemencé en J Ensemencement d ? une galerie d ? identi ?cation simpli ?ée en tubes voir ?ches techniques milieu de Kligler-Hajna - milieu de Clark et Lubs pour réaction de RM et VP - milieu urée-indole de Ferguson - recherche de la nitrate réductase sur mannitol-mobilité Ensemencement d ? une galerie API E pour staphylocoques coques