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Revision bio 1 TD CORRECTION REVISION MICROBIO BIO PARTIE GENETIQUE BACTERIENNE PRODUCION ET TITRAGE D ? UN STOCK DE PHAGES Production d ? un stock de phages Préparation de la souche bactérienne Quel est le rôle du CaCl rendre les cellules compétentes et

TD CORRECTION REVISION MICROBIO BIO PARTIE GENETIQUE BACTERIENNE PRODUCION ET TITRAGE D ? UN STOCK DE PHAGES Production d ? un stock de phages Préparation de la souche bactérienne Quel est le rôle du CaCl rendre les cellules compétentes et faciliter l ? adsorption phagique en perméabilisant la membrane des bactéries pour faciliter l ? entrée pénétration de l ? ADN phagique Que se passe-t-il durant l ? incubation sous agitation les membranes des cellules bactériennes se fragilisent et l ? agitation mécanique ampli ?e le phénomène Infection phagique Que se passe-t-il durant ces minutes d ? incubation sans agitation adsorption phagique sur la bactérie et injection de l ? ADN phagique Pourquoi ne faut-il pas agiter Il ne faut pas agiter sinon les phages ne parviennent pas à s ? adsorber sur les bactéries en phase de croissance Pourquoi prélever ??L de suspension phagique Expliquer les calculs particules phagiques mL particules phagiques pour L Donc le volume de suspension bactérienne à prélever pour obtenir une multiplicité d ? infection phage- bactérie est de x L pour une absorbance de UA bactéries dans ce cas Remarque les volumes de phages est bactéries sont à ajuster selon le titre phagique approximatif et l ? absorbance de la suspension bactérienne Mise en culture Témoin Lequel Donner sa composition et son intérêt Composition Gélose molle bactéries sans phages intérêt montrer que les bactéries son viables sur milieu LB et qu ? elles ne sont pas déjà infectées Lors de la lecture il doit y avoir un tapis bactérien et une absence totale de plages de lyse Que va-t-il se passer durant la nuit d ? incubation Les bactériophages provoquent un cycle lytique ils se multiplient et lysent les cellules infectées de nouveaux virions sont libérés et vont à leur tour infecter les cellules voisines en croissance on obtient ainsi des phages de lyses Extraction des produits phagiques Donner le mode d ? action du chloroforme Il s ? agit d ? un solvant organique qui désorganise les membranes composées de phospholipides en entra? nant l ? éclatement des cellules L ? objectif étant de débarrasser la suspension phagique de toutes les cellules vivantes bactéries pour que le titre phagique reste stable Titrage d ? un stock de phages Numération approximative rapide Technique des spots ??Trucs et astuces - lors de l ? ajout de la gélose molle bien préparer votre poste de travail et déposer la gélose dans tous les tubes avant de couler rapidement et de bien répartir la gélose molle sur toute la surface de la bo? te - attendre la prise en masse et le séchage complet de la surface très important pour éviter les coulures - lors des dépôts vous travaillez sur des tous petits volumes attention de bien homogénéiser lors de la prise d ? essai agiter le tube soigneusement et aspirer refouler fois en faisant des mouvements de rotation avec le cône de la pipette automatique en remontant vers le haut Ensuite déposer le volume pipette droite