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Colimetrie COLIMÉTRIE La colimétrie correspond aux méthodes de dénombrement des coliformes Les techniques de colimétrie ont pour objectif le dénombrement et éventuellement l ? identi ?cation des coliformes totaux des coliformes thermotolérants ou coliform

COLIMÉTRIE La colimétrie correspond aux méthodes de dénombrement des coliformes Les techniques de colimétrie ont pour objectif le dénombrement et éventuellement l ? identi ?cation des coliformes totaux des coliformes thermotolérants ou coliformes fécaux ou d ? Escherichia coli en particulier L ? intérêt de ces manipulations est de déterminer pour le produit testé une contamination fécale et d ? en apprécier l ? ampleur car les coliformes sont des bactéries vivant principalement dans les intestins De plus les coliformes thermotolérants et Escherichia coli survivant di ?cilement hors de l ? intestin traduiront donc une contamination fécale récente ? Témoins de contamination fécale - Coliformes totaux Un coliforme est une entérobactérie fermentant le lactose à ou C avec production de gaz -Coliformes thermotolérants Un coliforme thermotolérant est une entérobactérie fermentant le lactose à C avec production de gaz -Escherichia coli Escherichia coli est une entérobactérie fermentant le lactose à C avec production de gaz et produisant de l ? indole à C ? Principe de base des techniques de dénombrement Tous les milieux utilisés contiennent du lactose Les milieux liquides possèdent une cloche a ?n de mettre en évidence la production de gaz Un certain nombre de milieux utilisent des agents sélectifs inhibiteurs des bactéries Gram vert brillant cristal violet désoxycholate ? Des milieux récents chromogènes permettent le dénombrement direct d ? Escherichia coli par mise en évidence de l ? activité ? - glucuronidase ? Dénombrement des coliformes Le dénombrement des coliformes peut se faire selon les produits par des techniques en milieux liquides ou solides La démonstration de la nature coliforme ? n ? est jamais parfaite mais le principal est de suivre les normes permettant la standardisation des méthodes ? En milieu liquide -Milieu utilisé BLBVB cloche Bouillon Lactosé Bilié au Vert Brillant Ce milieu contient deux agents sélectifs la bile ou désoxycholate et le vert brillant Il contient des peptones et du lactose caractère biochimique Il n ? y a pas d ? indicateur de pH La production de gaz se fait à partir de l ? utilisation du lactose - Ensemencement ml de chaque dilution est introduit dans un tube de BLBVB cloche Homogénéiser l ? inoculum a ?n qu ? il se répartisse dans tout le tube cloche comprise -Incubation heures à C -Lecture Si un tube par dilution La présence d ? un trouble culture et la production de gaz dans la cloche au moins du volume de la cloche permet de conclure à la présence d ? au moins un coliforme dans le ml d ? inoculum de la dilution testée Si ou tubes par dilution on utilise la table de Mac Grady a ?n de déterminer statistiquement la quantité de coliformes présents dans un mL C-En milieu solide - Milieux utilisés gélose au désoxycholate ou gélose VRBL Ces deux milieux contiennent du désoxycholate qui inhibe les bactéries Gram du lactose utilisé comme source de carbone et d ? énergie et du rouge neutre indicateur de pH permettant la lecture du caractère