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CONTROLE DE QUALITE DE L’ANTIBIOGRAMME Présenté par : DJAID Mohamed CHU FRANTZ

CONTROLE DE QUALITE DE L’ANTIBIOGRAMME Présenté par : DJAID Mohamed CHU FRANTZ FANON - BLIDA Plan Introduction Contrôle de qualité interne: - Définition et objectifs. - Procédure de contrôle : 1-phase pré analytique 2-phase analytique 3-phase post analytique - Causes d’erreurs. - Recommandations. - Protocole de surveillance des tests de contrôle de qualité. • Contrôle de qualité externe. • Antibiogramme automatisé en milieu liquide Conclusion. INTRODUCTION L'antibiogramme est l'une des principales finalités de l'examen bactériologique. L'antibiogramme est l'une des principales finalités de l'examen bactériologique. Il est simple à réaliser par diffusion ou dilution, de façon manuelle ou automatisée. Il est simple à réaliser par diffusion ou dilution, de façon manuelle ou automatisée. Cependant, il peut être entaché d'erreurs si on ne respecte pas les conditions requises à une bonne exécution. Cependant, il peut être entaché d'erreurs si on ne respecte pas les conditions requises à une bonne exécution. Les résultats de l'antibiogramme doivent être constamment surveillés par un programme de contrôle de qualité qui doit être considéré comme partie intégrante de la méthode elle-même. Les résultats de l'antibiogramme doivent être constamment surveillés par un programme de contrôle de qualité qui doit être considéré comme partie intégrante de la méthode elle-même. Ce programme de contrôle fait appel à des souches bactériennes de référence qu'on doit mettre en culture chaque fois qu'un nouveau lot de milieu de Mueller Hinton ou de disques est employé. Ce programme de contrôle fait appel à des souches bactériennes de référence qu'on doit mettre en culture chaque fois qu'un nouveau lot de milieu de Mueller Hinton ou de disques est employé. Contrôle interne de qualité  A - Définition et objectifs : Le contrôle de qualité interne est un « auto contrôle », au cours duquel chaque microbiologiste doit contrôler toute technique pratiquée au laboratoire ; dans le cas présent il s’agit de la technique de l’antibiogramme. Ce contrôle a pour but d’assurer : La précision et la fiabilité de la technique des tests de sensibilité. La performance des réactifs utilisés dans les tests. La performance du personnel qui effectue les tests et la lecture. Procédure de contrôle - Le contrôle de qualité doit se faire à chaque nouveau lot de Mueller-Hinton et/ou d’antibiotiques. Ce travail de contrôle doit être permanent. Il est conseillé de désigner dans chaque laboratoire une personne chargée de la supervision du contrôle de qualité  Phase pré analytique: 1-contrôle du milieu : Préparation des boites Préparation des boites PH PH Humidité Humidité 1-contrôle du milieu Une concentration trop élevée en tymidine, entraîne une réduction des diamètres d’inhibition autour des disques de sulfamides et triméthoprime Pour cela, il faut tester le milieu M.H avec la souche de référence E. faecalis ATCC29212 ; un diamètre d’inhibition 20 mm doit être observé. - Une concentration trop élevée en ions Ca2+ et Mg2+ entraîne une réduction des zones d’inhibition pour les aminosides (testés pour P.aeruginosa), alors que de faibles concentrations donnent des zones d’inhibition trop grandes.  Les ions Zn2+ influencent l’activité des carbapénèmes.  Ces concentrations doivent être de: Calcium 50 – 100mg/l Magnésium 20 - 35 mg/l Concentration en thymidine : Concentration en thymidine : Concentration en cations divalents: Concentration en cations divalents: 2 - Disques d’antibiotiques:  Plusieurs disques sont disponible dans le commerce Il existe 03 normes servant a la production de disques imprégnés d’antibiotiques : -Normes DIN (Deutsche Institut fur Norming) -Normes WHO (World Health Organisation) - Normes FDA (Food Drug Administration) - Avant d’utiliser toute cartouche d’antibiotiques, il faut vérifier la date de péremption (surtout pour les bétalactamines) ainsi que la charge des disques. La réserve de ces disques doit être conservé à -20 c°(congélateur) La petite réserve de travail se conserve dans un réfrigérateur +4c°pendant 1 mois La traçabilité des disques antibiotiques doit être réalisée à l’aide des numéros de lots 3-Souches de référence - Les souches de référence devant être obligatoirement testées sont : E. coli ATCC 25922: AMPouAMX,_AMC_CZO_FOX_IPM_GEN_AMK_CHL_NIT_NAL_CIP_SXT_FOS (200ug) E. coli ATCC 25922: AMPouAMX,_AMC_CZO_FOX_IPM_GEN_AMK_CHL_NIT_NAL_CIP_SXT_FOS (200ug) S.pneumoniae ATCC 49619:PenG-(OXA1ug et ou5ug)-ERY-CLI-CHL RIF-SXT-VAN-LVX-TCY-PRI-FOS(50) S.pneumoniae ATCC 49619:PenG-(OXA1ug et ou5ug)-ERY-CLI-CHL RIF-SXT-VAN-LVX-TCY-PRI-FOS(50) P. aeruginosa ATCC 27853: TIC_PIP_CAZ_AZT_GEN_AMK_ERY_CLI_PRI_VAN_TEC_RIF_FOS(50ug)_SXT_F US_TCY_CHL_OFX P. aeruginosa ATCC 27853: TIC_PIP_CAZ_AZT_GEN_AMK_ERY_CLI_PRI_VAN_TEC_RIF_FOS(50ug)_SXT_F US_TCY_CHL_OFX S.aureus ATCC 25923: PEN_OXA(1ug)_FOX_KAN_GEN_AMK_ERY_CLI_PRI_VAN_TEC_RIF_SXT_FUS_ TCY_CHL_OFX_FOS(50ug) S.aureus ATCC 25923: PEN_OXA(1ug)_FOX_KAN_GEN_AMK_ERY_CLI_PRI_VAN_TEC_RIF_SXT_FUS_ TCY_CHL_OFX_FOS(50ug) H. influenzae ATCC 49247:AMP-AMC-CTX ou CRO-OFX-AZM-CHL-TCY-SXT. H. influenzae ATCC 49247:AMP-AMC-CTX ou CRO-OFX-AZM-CHL-TCY-SXT. 3 - Souches de référence : Dés leur réception, les souches de références doivent être isolées sur milieu adéquat, une gélose nutritive ordinaire suffit pour les bactéries non exigeantes. A partir de cette culture faire 12 congélations à -70°C. Chaque mois sortir un tube de congélation de chaque souche qui sera testée. Refaire 12 congélations pour l’année suivante à partir du 12ème tube de conservation. Phase analytique: Contrôle de l’inoculum: Préparer l’étalon 0,5 Mc Farland (0,5mlde BaCl2 1%,compléter à 100mlH2SO4, D O de 0,08à0,1 lue à 625nm) homogénéiser et comparer à l’inoculum préparé Inoculum et étalon doivent avoir la même turbidité lorsqu’ils sont examinés sur un fond rayé Privilégier l’utilisation des densitomètres Le contrôle de qualité doit être pratiqué par tous les techniciens et jamais par un seul. Phase post analytique: Lecture et interprétation : La lecture se fait à l’aide d’un pied à coulisse, maintenu perpendiculairement à l’axe optique Les diamètres sont comparés aux valeurs critiques de la table de lecture n° 13 du standardisation de l’antibiogramme. Pour les molécules :acide fusidique, amoxicilline, fosfomycine50ug, oxa5ug, pristinamycine ; les critères du CA-SFM ont été adoptés. Causes d’erreurs: Phase pré analytique:  milieu de culture: • Défaut de préparation • Lots défectueux • Coulage non horizontal • Épaisseur inferieur a la norme 4mm • Dessiccation excessive au cours de la conservation  disques d’antibiotiques: • Mauvaise conservation ou péremption perte d’activité  souches bactériennes : • Mauvaise identification , contamination Causes d’erreurs: Phase analytique: Inoculum trop chargé ou pas assez Mauvais ensemencement(stries non serrées) Mauvaise application des disques à la surface Non respect des conditions d’incubation Phase post analytique: • Erreur de mesure des zones d’inhibition • Erreur de transcription des résultats • Contamination • Dérive génétiques des souches Recommandations pour le contrôle de qualité interne : Mise en place d’un système de traçabilité pour l’identification du personnel technique lors de la saisie afin de tester leur performance. Charger un membre de l’équipe de la conservation et l’entretien des souches de références. Aliquoter des souches de références selon la procédure recommandée. Changer les souches au début de chaque mois. Retirer les souches dont les résultats du CQ ne sont pas satisfaisantes. Les cartouches de disques d’antibiotiques doivent être correctement conservées Recommandations pour le contrôle de qualité interne : Les testes doivent être éffectuer à partir de culture fraiches de 18 heures. Utiliser un densitomètre pour une mésure exacte de l’inoculum bactérien. Veiller à prendre en considération l’algorithme ou le protocole de surveillance présenté dans le fascicule de standardisation pour le suivi du CQI. Veiller à détecter en temps réel l’anomalie constaté afin de la résoudre suivant le protocole de surveillance. Le nombre minimum de tests à effectuer est passé depuis 2009 de 20 à 30 tests. Protocole de surveillance des tests de contrôle de qualité : Le contrôle a lieu quotidiennement jusqu’à ce que la performance soit satisfaisante(pas plus d’un test incorrect sur 30 tests),la fréquence de contrôle peut ensuite devenir hebdomadaire. Si la performance est mauvaise; les causes doivent être recherchées. Continuer à tester quotidienne ment Continuer à tester quotidienne ment A- Rythme quotidien A- Rythme quotidien Si ≤ à 1 test incorrect (out) tout les 20 tests consécutifs Si ≤ à 1 test incorrect (out) tout les 20 tests consécutifs Continuer à tester quotidiennement Continuer à tester quotidiennement Pour chaque molécule si : 1 test out sur 20 tests Ou 3 tests out sur 30 tests Pour chaque molécule si : 1 test out sur 20 tests Ou 3 tests out sur 30 tests 1 CQ test par semaine Si > à 1 test out parmi 1 série de 20 tests Si > à 1 test out parmi 1 série de 20 tests Apporter une action correctrice Apporter une action correctrice Une erreur évidente* Une erreur évidente* Rester le même jour après correction de l’erreur Rester le même jour après correction de l’erreur Correction des résultats Correction des résultats erreur non évidente erreur non évidente Action correctrice immédiate Action correctrice immédiate Corriger la cause et retester le m jour et 5 j de suite Corriger la cause et retester le m jour et 5 j de suite Pas de changem ent Pas de changem ent Investigation approfondie Résultat des CQ Résultat des CQ B- Rythme Hebdomadaire Résultat de tests quotidiens CQ satisfaisants (1 test out parmi 20/ ou 3 out parmi 30 résultats d’une série ) Une erreur non évidente Une erreur évidente Après correction,retest le même jour Investigations plus approfondie*** -recherche d’une source possible d’erreur Rester le même jours et 5 jours de suit Action correctrice immédiate*** Quelques résultats toujours incorrects Résultats toujours incorrects Reprendre le rythme hebdomadai re Reprendre le rythme hebdomadai re Mise en place d’un rythme Quelques tests incorrects Action Correctrice Correction des résultats Tout les résultats corrects Contrôle externe de uploads/Management/ controle-de-qualite-expose.pdf