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Life Sciences Les bonnes pratiques de culture cellulaire 2 Life Sciences Les bo

Life Sciences Les bonnes pratiques de culture cellulaire 2 Life Sciences Les bonnes pratiques en culture cellulaire • EPI (Equipement de protection individuel) – Porter des gants pour manipuler des cellules – Changer les gants régulièrement et immédiatement en cas de projection de matériel biologique – Porter une blouse propre et réservée au laboratoire de culture cellulaire – Porter des lunettes de sécurité 3 Life Sciences Technique aseptique • Désinfecter la zone de travail avant et après toute manipulation • Travailler sous un poste de sécurité microbiologique bien entretenu et contrôlé régulièrement • Ne pas porter les mains au visage (pour se moucher, replacer une mèche de cheveux…) • Eviter de générer des aérosols 4 Life Sciences Travailler sous PSM II • Ne pas bloquer les grilles des veines de garde à l’avant et à l’arrière du plan de travail • Décontaminer tout le matériel avant de l’introduire sous le PSM II • Ne pas stocker de déchet sous le PSM • Ne pas stocker de matériel inutile sous le PSM • Attendre 15-20 minutes avant de commencer à travailler sous le PSM 5 Life Sciences • Ne pas faire de mouvements brusques, ne pas passer les mains au-dessus des récipients • En cas de projection ou de renversement, nettoyer et décontaminer immédiatement le plan de travail BMBL, 5th ed. Travailler sous PSM II • Ne pas laisser les flacons de culture ou de milieu ouverts • Protéger les plaques de culture avec leur couvercle 6 Life Sciences • Travailler au centre du plan de travail, en retrait de la veine de garde • Placer les équipements électriques à l’arrière du PSM • Interrompre les opérations de pipettage pendant le fonctionnement de ces équipements et garder les flacons fermés, • Attention à la décontamination par UV! – Les lampes UV ont une duréée de vie limitée (~3000 heures): elles ne génèrent plus qu’une lumièere bleue et pas de rayonnement UV Travailler sous PSM II 7 Life Sciences Incubateurs • Limiter la fréquence et la durée d’ouverture • Vérifier régulièrement le contenu et éliminer les flacons de culture “orphelins” • Porter des gants lors de la manipulation des flacons dans les incubateurs • Garder leur environnement propre (plans de travail voisin où sont déposés momentanément les flacons) • Bac d’eau – Utiliser un algicide type Aquaguard – Essuyer régulièrement la condensation qui peut se former sur la porte intérieure, le fond de l’incubateur ou sur les parois puis désinfecter à l’éthanol 70% 8 Life Sciences Incubateur “Do’s and Don’ts” • Don’t: à ne pas faire – Ne pas utiliser le même incubateur pour des cultures de cellules et des bactéries ou des mycoplasmes (réaliser ces différents types de culture dans des laboratoires séparés) – Ne pas utiliser d’emballages papier ou carton dans les incubateurs – Ne pas utiliser de désinfectants ayant des effets cytotoxiques • Do: à faire – Utiliser des flacons de culture à bouchons entilés – Désinfecter en cas de projection de liquide – Garder l’environnement propre: microscope, chariot, plans de travail,,, 9 Life Sciences L’entretien du laboratoire • Nettoyer et désinfecter les surfaces de travail avant et après toutes manipulations • Penser à la platine du microscope, au chariot utilisé pour trasporter le matériel • Nettoyer et désinfecter les sols régulièrement en utilisant des lingettes à usage uniques 10 Life Sciences Entretien du PSM • Le PSM doit être nettoyer au moins une fois par mois, plus fréquemment en fonction du nombre d’utilisateur et de l’activité du laboratoire – Retirer les griles du plan de travail – Nettoyer la base du PSM, désinfecter et replacer les grilles propres – Il peut être nécessaire de faire tremper la surface si elle est très sale 11 Life Sciences Entretien des incubateurs • Nettoyer et désinfecter régulièrement les incubateurs • Retirer les étagères – Les nettoyer, l’autoclavage est possible – Nettoyer et désinfecter les parois internes – Nettoyer et désinfecter le bac d’eau, utiliser de l’eau stérile – Eventuellemnt changer les filtres HEPA et les tubes d’alimentation en CO2 12 Life Sciences Entretien des bains-marie • Nettoyer régulièrement le BM, renouveler l’eau fréquemment • Utiliser un couvercle pour filtrer la lumière et limiter le développement d’algues • Utiliser des anti-fongiques • NE PAS UTILISER l’azide de sodium: – Risque explosif dans les canalisations quand éliminé dans l’évier – Toxique pour l’environnement 13 Life Sciences Entretien des pipetteurs • Penser à changer régulièrement les filtres des pipetteurs qui sont une source de contamination cachée! 14 Life Sciences Elimination de matériel contaminé • Vous suspectez une contamination? N’ouvrez pas les flacons! • Fermez hermétiquement tous les bouchons. • Evacuez les flacons contaminés dans un laboratoire extérieur et ajouter de l’eau de Javel. • Après une nuit d’action, eliminer les déchets selon la procédure du laboratoire, 15 Life Sciences Le quizz des bonnes pratiques Trouvez ce qui ne va pas sur chaque photo… - Moisissures dans le récipient de collecte des déchets liquides - Pas de filtre sur la ligne - Pas de bac de rétention: le récipient devrait être placé dans un bac et pas sur le sol Cette personne travaille trop prêt de la veine de garde avant: - Elle n’est pas protégée d’un risque infectieux venant de son matériel - Son matériel n’est pas protégé d’une contamination microbienne uploads/Science et Technologie/ bpl-culture-cellulaire.pdf