UNIVERSITE MARIEN NGOUABI FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES MEMOIRE Pour l’obt

UNIVERSITE MARIEN NGOUABI FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES MEMOIRE Pour l’obtention du Diplôme de Master ès Sciences et Techniques Mention : Biologie Parcours : Sciences Biologiques Spécialité : Biologie Cellulaire et Moléculaire Option : Biochimie et Microbiologie Appliquées Présenté et soutenu publiquement Par NKANGOU Andra Valaire Amour Titulaire d’une Licence en Biologie Cellulaire et Moléculaire Le 13/08/2021 TITRE : SUPERVISEUR SCIENTIFIQUE Etienne NGUIMBI, Maître de Conférences CAMES, Université Marien NGOUABI DIRECTEUR DE MEMOIRE Aimé Christian KAYATH, Maître-Assistant CAMES, Université Marien NGOUABI JURY Président : Raoul AMPA, Maître de Conférences CAMES, FST/UMNG (Congo) Membres : Alain Brice VOUIDIBIO MBOZO, Maître-Assistant CAMES, FST/UMNG (Congo) Aimé Christian KAYATH, Maître-Assistant CAMES, FST/UMNG (Congo) Année 2021 No d’ordre :……. Formation des biofilms chez les bactéries du genre Bacillus dans les aliments fermentés i Amour Valaire Andra NKANGOU : Mémoire de Master / Faculté des Sciences et Techniques / UMNG Aimer c’est trouver sa richesse hors de soi... Ainsi avec un cœur ouvert, je dédie ce travail à : A mon père NKANGOU Blaise pour sa confiance indéfectible, son extraordinaire dévouement à faire de moi un jeune homme instruit et accompli. A ma mère KIBONGUI Marie Josée Edwige, à qui je voue tant de sentiments, car tu m’as donné la vie, de l’affection à revendre, du courage et de précieux conseils pour réussir dans mes études. Dédicaces ii Amour Valaire Andra NKANGOU : Mémoire de Master / Faculté des Sciences et Techniques / UMNG Je remercie Monsieur Basile Guy Richard BOSSOTO, Professeur Titulaire CAMES, Doyen de la Faculté des Sciences et Techniques pour m’avoir donné l’autorisation de défendre ce mémoire. J’adresse mes vifs remerciements à Monsieur Etienne NGUIMBI, Maitre de Conférences CAMES, pour avoir marqué ces travaux de mémoire de sa culture scientifique, son suivi et son apport multiforme, en qualité de superviseur scientifique de ce travail. Il m’est tellement agréable d’exprimer ma profonde gratitude à mon directeur de mémoire, Monsieur Aimé Christian KAYATH, Maître-Assistant CAMES. J’ai été séduit jusqu’aujourd’hui par sa rigueur scientifique, son altruisme et son sens de pédagogie pour l’obtention des résultats. Grâce à votre investissement personnel dans ce travail, vous avez été comme le grain de sel qui manquait dans la préparation de ma carrière académique. Des remerciements sincères sont formulés à l’égard des membres du jury d’avoir accepté d’évaluer ce travail, en l’occurrence Monsieur Raoul AMPA, Maître de Conférences CAMES, en sa qualité de Président du jury, et Monsieur Alain Brice VOUIDIBIO MBOZO, Maître- Assistant CAMES en sa qualité d’examinateur. A Monsieur Joseph GOMA-TCHIMBAKALA, Maître de Conférences CAMES, Directeur Général de l’Institut national de Recherche en Sciences Exactes et Naturelles (IRSEN), je vous remercie pour m’avoir donné l’occasion de réaliser mes travaux de recherche au sein de la structure dont vous avez la charge. Je profite aussi de remercier particulièrement tous les enseignants du Département de Biologie, de la Faculté des Sciences et Techniques qui ont contribué à ma formation pendant mon cursus universitaire. Cordialement, mes sincères remerciements vont à l’endroit de mes ancien(ne)s ELENGA Paola, KAYA-ONGOTO Moïse Doria, KINOUANI Duchel, OKOUAKOUA Yannick et MOUELLET Effort, pour leurs qualités de travail en équipe. Un grand merci à mes collègues du laboratoire MAYEYENDA LOUMP Arnie Sermelle, PASSY MAMBOU Marie Vincent, LIKIBI Trésor, LEMINGOU Cliff, KIYINDOU Nandolge, MADZOU Sincère et MAHOUNGOU Francisca. Une pensée gratifiante à toute la famille NKANGOU et KIBONGUI, plus spécifiquement à mon frère aîné NKANGOU Clyde, ainsi qu’à mon petit frère NKANGOU Eminent Joy. Que ce travail vous renouvelle toutes mes pensées positives. Remerciements iii Amour Valaire Andra NKANGOU : Mémoire de Master / Faculté des Sciences et Techniques / UMNG L’Institut national de Recherche en Sciences Exactes et Naturelles (IRSEN) où a été réalisé le présent travail, est situé dans l’enceinte de la Cité Scientifique de Brazzaville (Ex-Orstom) au château d’eau dans le premier arrondissement Makélékélé. Cadre institutionnel et juridique Créé par la Loi N° 26-2012 du 24 septembre 2012, l’Institut national de Recherche en Sciences Exactes et Naturelles est un établissement public administratif à caractère scientifique et technique. Missions assignées : L’Institut national de Recherche en Sciences Exactes et Naturelles a pour mission :  D’organiser, conduire et exécuter toutes recherches fondamentales et appliquées visant la promotion du développement national dans les champs disciplinaires constitutifs des sciences exactes et naturelles ;  De mettre en œuvre une programmation scientifique autour des axes prioritaires pour le développement du pays à partir des besoins réels des populations et des utilisateurs ;  De faire les inventaires de la flore, de la faune, de leur écosystème et des facteurs météorologiques du Congo ;  D’étudier les propriétés des ressources animales, végétales en vue de la valorisation de leur utilisation ;  Contribuer à l’élaboration de la politique nationale de recherche dans les domaines relevant de sa compétence ;  Publier et diffuser les résultats de ses travaux et concourir au développement des connaissances et de l’information scientifique et technologique dans les domaines des sciences exactes et naturelles ;  Apporter son concours à la formation, à la recherche et par la recherche ; effectuer des expertises scientifiques dans son champ de compétence. L’institut national de Recherche en Sciences Exactes et Naturelles (IRSEN) est organisé selon les statuts approuvés par le Décret n° 2016-61 du 26 février 2016. Présentation de la structure d’accueil iv Amour Valaire Andra NKANGOU : Mémoire de Master / Faculté des Sciences et Techniques / UMNG ORGANISATION ADMNISTRATIVE DE L’INSTITUT NATIONAL DE RECHERCHE EN SCIENCES EXACTES ET NATURELLES (IRSEN) v Amour Valaire Andra NKANGOU : Mémoire de Master / Faculté des Sciences et Techniques / UMNG Figure 1. Développement et structure d’un biofilm bactérien.. ....................................... 15 Figure 2. Voie de signalisation Spo0A menant à la formation de biofilm chez B. subtilis16 Figure 3. Induction de la formation de matrice extracellulaire par la surfactine............ 17 Figure 4. Aspect macroscopique des isolats de Bacillus spp. sur milieu Mossel. ............. 37 Figure 5. Aspects macroscopiques de deux isolats de Bacillus spp. purifiés sur le milieu Mossel. ............................................................................................................................. 37 Figure 6. Résumé du nombre d'isolats de Bacillus spp. obtenus par aliment fermenté... 38 Figure 7. Résumé des caractéristiques phénotypiques et biochimiques des isolats de Bacillus spp. ..................................................................................................................... 39 Figure 8. Profil phénotypique des isolats de Bacillus spp. producteurs (coloration noire) ou non (coloration rouge) de biofilms sur GRC............................................................... 39 Figure 9. Bilan des isolats de Bacillus spp. producteurs ou non de biofilms.................... 40 Figure 10. Bilan des isolats de Bacillus spp. producteurs de biofilms selon les phénotypes ++ (fort) ou + (modéré). ................................................................................................... 40 Figure 11. Criblage des isolats de Bacillus spp. producteurs de biofilm selon les phénotypes ++ (fort) ou + (modéré) par aliment.............................................................. 40 Figure 12. Profil phénotypique des isolats de Bacillus spp. producteurs et non producteurs de biofilms après coloration au cristal violet à 2%. ......................................................... 41 Figure 13. Criblage de la production de biofilms par la méthode de tube à essai des isolats positifs sur milieu GRC.................................................................................................... 41 Figure 14. Criblage de la production de biofilms par la méthode de tube à essai des isolats négatifs sur milieu GRC................................................................................................... 42 Figure 15. Emulsion de l’essence par quelques isolats de Bacillus spp. .......................... 43 Figure 16. Index d'émulsification avec la culture cellulaire et le surnageant acellulaire.. ......................................................................................................................................... 43 Figure 17. Extrait du biosurfactant obtenu après précipitation à l'HCl.......................... 44 Figure 18. Comportement des extraits de biosurfactant dans la l’inhibition des bactéries pathogènes........................................................................................................................ 44 Figure 19. Diamètres des halos d’inhibition d’extraits de biosurfactants obtenus .......... 45 Figure 20. Alignement des séquences de trois espèces (B. subtilis, B. pumilus et B. licheniformis) avec des amorces spécifiques qui s’hybrident. .......................................... 46 Figure 21. Profil électrophorétique de l’ADN génomique de quelques isolats de Bacillus spp. sur gel d’agarose à 1 %. ........................................................................................... 47 Figure 22. Profil électrophorétique sur gel d’agarose à 1% des amplicons de la PCR du gène fibE des isolats de Bacillus spp................................................................................. 48 Figure 23. Profil électrophorétique sur gel d’agarose à 1% des produits PCR du gène de l’ARNr 16S des isolats de Bacillus. .................................................................................. 49 Figure 24. Profil électrophorétique de digestion enzymatique sur gel d’agarose à 1 % des produits PCR du gène fibE. ............................................................................................. 50 Figure 25. Profil électrophorétique sur gel d’agarose à 2 % des produits PCR des gènes eps, tasA, ymcA et yfiQ des isolats de Bacillus.................................................................. 51 Liste des figures vi Amour Valaire Andra NKANGOU : Mémoire de Master / Faculté des Sciences et Techniques / UMNG Tableau I: Classification des bactéries du genre Bacillus ..................................................9 Tableau II: Biosurfactants et origines bactériennes. ....................................................... 11 Tableau III: Composition du biofilm bactérien. .............................................................. 14 Tableau IV: Nature, provenance et codification des échantillons.................................... 20 Tableau V: Présentation du matériel de laboratoire ....................................................... 21 Tableau VI: Mélange réactionnel de la PCR du gène fibE .............................................. 30 Tableau VII: Séquences d’oligonucléotides utilisées pour l’amplification du gène fibE . 31 Tableau VIII: Programme d’exécution de l’amplification par PCR du gène de fibE ..... 31 Tableau IX: Mélange réactionnel de la PCR du gène de l'ARNr 16s .............................. 32 Tableau X: Séquences d’oligonucléotides utilisées pour l’amplification du gène ARNr 16S ......................................................................................................................................... 32 Tableau XI: Programme d’exécution de l’amplification par PCR du uploads/Science et Technologie/ formation-des-biofilms-chez-les-bacteries-du-genre-bacillus-dans-les-aliments-fermentes.pdf

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Science et Technologiepositif négatif isolats bacillus bâtonnets
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