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Tp 1 2 Université de Tlemcen Faculté des SNV STU Département de Biologie Tp Examen microbiologie des prélèvements cliniques LARABI DOUNIA RACHA CPrincipe utilisation d ? un jeu de colorants décolorants agissant chimiquement sur les éléments de la paroi ba

Université de Tlemcen Faculté des SNV STU Département de Biologie Tp Examen microbiologie des prélèvements cliniques LARABI DOUNIA RACHA CPrincipe utilisation d ? un jeu de colorants décolorants agissant chimiquement sur les éléments de la paroi bactérienne qui en ?n de réaction prennent une teinte caractéristique en onction de sa compostion Objectifs reveler la forme morphologie de la bactérie coque bacille coccobacille forme intermediaire entre bacille et coque spirale ? visualiser le mode de rassemblement des bactéries visualiser la couleur teinte de la bactérie et donc de prédire sa structure de paroi Matériel Les colorants Violet de gentiane ou cristal violet bleu violacé qui colore le peptidoglycane Lugol iodo-iodure de potassium de couleur brun foncé il s ? agit d ? un colorant mordant permettant de ?xer le cristal violet sur les structures bactérinnes La fuschine colorant rouge qui permet de recolorer les structures bactériennes des Gram négatif qui seront décolorés par l ? alcool Le décolorant L ? alcool éthylique a De Cgauche a droite Lugol -Alcool -Violet de gentiane ou cristal violet -fuschine Procedure Cf TP de bactériologie Confection des frottis Déposer une goutte d'H sur la lame Toucher une colonie à l'aide d'une pointe jaune ou d'un cure-dent stérile pour prélever des bactéries Il n'est pas nécessaire de prendre beaucoup de bactéries Frotter la pointe dans la goutte d'eau Passer fois la lame dans la petite amme veilleuse du bec Bunsen pour ?xer l'échantillon à la chaleur Etapes de préparation d ? une frottis C Coloration et explications attention aux éclaboussures mettez des gants Coloration au violet de gentiane minute Mordansage par le lugol sec Décoloration a l ? alcool a sec contre-coloration a la fuschine minute Technique et principe de Coloration de Gram Explication Le violet de gentiane colore le cytoplasme des bactéries Le Lugol composé iodé est un mordant qui permet de ?xer le violet dans les bactéries La solution de décoloration contient un mélange d'alcool et d'acétone Les pores de la paroi des Gram sont fermés par la déhydratation à l'alcool La paroi est alors imperméable et le colorant violet reste dans les bactéries La membrane des Gram- est dissoute par le mélange alcoolacétone La paroi plus mince et de composition di ?érente laisse alors sortir la coloration violette C la solution de safranine rose Ce colorant permet de visualiser les bactéries Gram- décolorées à l'étape précédente Cette coloration moins forte que le violet n'a ?ecte pas la couleur des Gram Observation Observer au microscope grossissement x ou avec une goutte d'huile à immersion au grossissement x Observer au microscope grossissement x ou avec une goutte d'huile à immersion au grossissement x Résultat j ? ai observédes Cocci a Gram en amas Staphylococcus aureus Figure image microscopique d ? une bactérie Staphylococcus aureus Gram Et des Bacilles E coli a gram négatif disposés de façon isolés CFigure image microscopique d ? une bactérie Bacilles E coli a gram négatif Conclusion Le colorant utilisé est le violet de gentiane qui colore l'intérieur des bactéries Celles-ci