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Bio 1 Créateur en du premier stage HACCP en France Avec l'ouverture d'une unité de biologie moléculaire ASEPT Sarl poursuit le développement de ses activités de laboratoire voir http www asept fr labo htm et vous présente une documentation succinte sur LE

Créateur en du premier stage HACCP en France Avec l'ouverture d'une unité de biologie moléculaire ASEPT Sarl poursuit le développement de ses activités de laboratoire voir http www asept fr labo htm et vous présente une documentation succinte sur LES OUTILS DE LA BIOLOGIE MOLECULAIRE AU SERVICE DE LA MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE Méthode PCR détection rapide de bactéries pathogènes ?? Son atout détection des bactéries pathogènes dans vos produits alimentaires en moins de heures ?? Principe détection de germes pathogènes Listeria et Salmonella dans les produits alimentaires par caractérisation génotypique Connaissance de l'écologie microbienne des ateliers de transformation ?? Caractérisation de souches bactériennes pathogènes Eschercichia coli Listeria Salmonella ou non par méthode RFLP digestion enzymatique de l'ADN bactérien PGFE séparation de longs fragments d'ADN par champ pulsé mesure du pourcentage d'homologie entre les souches a ?n de conna? tre les origines et les voies de contaminations de vos produits Pour tout complément d ? information contactez Corine JABY c jaby asept fr Muriel COIGNARD m coignard asept fr Rédaction mai Mise à jour avril ?ASEPT Sarl - - CSommaire La technique PCR Polymerase Chain Reaction - Détection de Listeria monocytogenes par ampli ?cation génique - La technique Nested-PCR nPCR - La technique RAPD ou AP-PCR - La technique Reverse- Transcriptase RT-PCR - Le Ribotypage - Génotypage des souches bactériennes par macrorestriction - Les puces d ? ADN ou CHIPS - Génotypage des bactéries pathogènes alimentaires - Comparaison de techniques Electrophorèse en champs pulsés RFLP- PFGE et Ribotypage automatisé Riboprinter ?ASEPT Sarl - - CLA TECHNIQUE PCR Polymerase Chain Reaction HISTORIQUE ?? Découverte du concept technologique K Mullis ?? Développement du concept A Herlich de la compagnie CETUS PRINCIPE La technique PCR permet d ? ampli ?er spéci ?quement une séquence d ? ADN ou un gène ampli ?cation génique au moyen d ? amorces et de la Taq polymerase CYCLE PCR comprend trois étapes ?? DENATURATION ?? HYBRIDATION ?? ELONGATION - C - C - C A chaque cycle il y a un DOUBLEMENT des copies du fragment d ? ADN ? En général on réalise - cycles de PCR environ h d ? ampli ?cation AVANTAGES SPECIFICITE - SIMPLICITE kit prêt à l ? emploi automatisation de la méthode - RAPIDITE extraction h ampli ?cation h détection h LIMITES CONTAMINATION bien cloisonner les di ?érentes étapes - DÉTECTION DE BACTÉRIES MORTES recours au pré-enrichissement - h PRÉSENCE D ? INHIBITEURS DE LA TAQ -POLYMERASE bien traiter l ? étape d ? extraction d ? ADN ou d ? ARN APPLICATIONS DETECTION DES BACTERIES PATHOGENES ALIMENTAIRES - DETECTION DES LEVURES et MOISISSURES - IDENTIFICATION BACTERIENNE et FONGIQUE ?ASEPT Sarl - - CDETECTION DE LISTERIA MONOCYTOGENES PAR AMPLIFICATION GENIQUE Facteur de pathogénicité principal la Listeriolysine O codé par le gène hlyA Gène hlya DETECTION DE SALMONELLA PAR AMPLIFICATION GENIQUE ST ST DETECTION DES FRAGMENTS AMPLIFIÉS Gel d ? agarose marqueur de poids moléculaire révélation avec le BET Hybridation moléculaire sur ?ltre Dot-blot en solution tech sandwich sondes froides et sondes chaudes ?ASEPT