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Materiels methodes 1 materiels 1 1 materiels biologiques 1 1 1 souche etudiees

Matériels méthodesMatériels Matériels biologiques Souche étudiées Sont inclus dans cette étude des souches d'Escherichia coli isolées à partir de divers prélèvements sonde urinaire prélèvement rectal plaie et environnements au nivaux de deux services traumatologie et médecine interne du CHU de Tlemcen Souches de références ATCC Pseudomonas aeruginosa de phénotype sauvage K Escherichia coli résistance à la rifampicine Kp nasey Klebsiella pneumoniae Milieux de culture Milieux de culture liquides Bouillon nutritif BN Fluka Bouillon c ?ur cerveau BHIB Fluka Milieux de culture solides Gélose nutritive GN Milieu Mac Conkey MC Fluka Milieu Muller-Hinton MH Fluka Milieu triple sucres TSI Solutions et tampons Eau ultra pure Eau distillées stérile Solution de BET Antibiotiques En disque Les ?- lactamines Amoxicilline AMX amoxicilline acide clavulanique AMC ceftazidime CAZ Imipénéme IMP Aztréonam ATM céfoxitine FOX et céfotaxime CTX Les aminosides amikacine AK Gentamicine GN Les quinolones acide nalidixique NA nor oxacine NOR et cépro oxacine CIP CMatériels méthodes Autre colistine CS En poudre Céftazidime CAZ céfotaxime CTX cépro oxacine CIP Aztréonam ATM amikacine AK céfépime FEP et fosfomycine sont des poudres à concentration Méthodes Prélèvements Les prélèvements ont été réalisés par écouvillonnage sur des plaies des sondes urinaires les urine des pus et environnement puis transportés à température basse ou froid C au laboratoire l ? écouvillon est introduit dans un tube contenant du bouillon nutritif ensuite incubés dans l ? étuve à C pendants heures Isolement et puri ?cation L ? isolement est réalisé sur gélose Mac Conkey milieu sélectif pour les entérobactéries et on porte à incubation pendent heures à C On réalise la puri ?cation des souches par plusieurs passages successifs sur gélose par strie Mac Conkey a ?n d'obtenir des souches jeunes et pures Identi ?cation Test TSI milieu tripe sucres Le milieu TSI est ensemencé par piqure central de culot et par stries sur la pente Après incubation à C pendant heures ce test permet la mise en évidence de l'utilisation de glucose lactose et du saccharose avec ou sans dégagement de gaz La coloration jaune est due à l'acidi ?cation du milieu au niveau de la pente après la fermentation du glucose et ou saccharose La production d ? hydrogène sulfuré H S se révèle par une coloration noire due à la transformation du sulfure de fer par réduction de sulfate ferreux dans le milieu Galerie API E Bio Mérieux ? Principe La galerie API E comporte microtubes contenant des substrats sous forme déshydratés Les tests sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstituée les milieux Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs CMatériels méthodes ? Mode opératoires Réunir fond et couvercle d'un boite d'incubation et répartir l'eau distillé dans les alvéoles pur créer une atmosphère humide Inscrire la référence ou le code de la souche sur la languette latérale de la boite Déposer la galerie dans la boite d'incubation Réaliser une suspension bactérienne par homogénéisation d'une seule colonie bien isolée sur milieu gélosé dans de