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Tpe centrifugation gia SOMMAIRE INTRODUCTION - PRINCIPE DE BASE -METHODE ET APPAREILLAGE - ROTORS -APPLICATION A LA BIOCHIMIE - MANIPULATION ET ASPECT PRATIQUE -CALCUL CINTRODUCTION Beaucoup d'expériences en biochimie exigent une ou plusieurs étapes de ce

SOMMAIRE INTRODUCTION - PRINCIPE DE BASE -METHODE ET APPAREILLAGE - ROTORS -APPLICATION A LA BIOCHIMIE - MANIPULATION ET ASPECT PRATIQUE -CALCUL CINTRODUCTION Beaucoup d'expériences en biochimie exigent une ou plusieurs étapes de centrifugation Cette technique permet d'exposer des échantillons à de fortes accélérations qui permettent la séparation des constituants On peut ainsi fractionner une préparation en un sédiment ou culot constitué de matériel plus ou moins solidement entassé dans le fond du tube à centrifuger et en un surnageant qui sera le liquide résiduel au dessus du sédiment -PRINCIPES DE BASE Une particule soumise à un champ gravitationnel tend à se déplacer dans ce champ jusqu'à ce qu'elle rencontre une résistance capable de l'arrêter complètement Ce principe fondamental de physique est très utilisé en biochimie pour séparer des précipités des cellules des organites et même des macromolécules En mettant une préparation biochimique dans le rotor d'une centrifugeuse et en faisant tourner celui-ci on génère une accélération qui va pousser les particules qui la composent vers l'extérieur du rotor c'est-à-dire le fond du tube à centrifuger La vitesse avec laquelle se déplaceront ces particules est proportionnelle à la force gravitationnelle à laquelle la particule est soumise la masse de la particule la di ?érence entre la densité de la particule et celle du solvant et inversement proportionnelle à la friction avec le milieu en fonction de la taille et à la géométrie des particules Une particule donnée e g une sous-unité d'un ribosome a donc une vitesse spéci ?que de sédimentation lors d'une centrifugation parce qu'elle a une combinaison donnée de masse de densité et de morphologie On exprime souvent cette caractéristique en coe ?cient de sédimentation généralement exprimée en unités Svedberg S Plus une particule est massive ou dense ou ne génère qu'une faible friction due à sa forme plus son S sera élevé Cette unité de taille est particulièrement Cemployée pour caractériser les particules ribosomiques C'est pourquoi on parle encore de ribosomes S chez les procaryotes et S chez les eucariotes On peut facilement générer une force centrifuge en faisant tourner à haute vitesse un rotor pouvant contenir des tubes à centrifuger Une force gravitationnelle se forme alors perpendiculairement à l'axe de rotation du rotor -MÉTHODES ET APPAREILLAGE Centrifugeuses La principale limite qui détermine la vitesse de rotation du rotor est évidemment la force du moteur qui le fait tourner Plus le rotor est lourd et volumineux plus l'e ?ort que doit fournir le moteur est grand On a développé une gamme d'appareils en fonction des besoins expérimentaux particulièrement au niveau des accélérations requises des volumes de matériel à centrifuger de la température de travail etc Centrifugeuses de table Les modèles les plus simples souvent appellées centrifueuses cliniques permettent d'atteindre de faibles accélérations à xg à des vitesses de rotation relativement basses moins de RPM Certains modèles sont réfrigérés certains autres non Centrifugeuses au sol Ces appareils sont un peu plus complexes Elles permettent d'obtenir des vitesses de rotation de l'ordre de RPM donnant pour les plus petits rotors