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Immuno fluorescence PRINCIPE Immuno uorescence ? Reconnaissance d ? une protéine produite par le bioagresseur appelée antigène par une protéine produite en laboratoire appelée anticorps qui est spéci ?que à l ? agent recherché ? Pour la révélation une pro

PRINCIPE Immuno uorescence ? Reconnaissance d ? une protéine produite par le bioagresseur appelée antigène par une protéine produite en laboratoire appelée anticorps qui est spéci ?que à l ? agent recherché ? Pour la révélation une protéine uorescente est liée à un second type d ? anticorps La protéine uorescente émet de la lumière lorsqu ? elle est exposée à une certaine longueur d ? onde ? La lecture s ? e ?ectue à l ? aide d ? un microscope à uorescence ? Si l ? agent n ? est pas présent il n ? y a pas émission de couleur car les anticorps ne se sont pas ?xés Immuno uorescence directe ? Dans cette technique la protéine uorescente appelée uorochrome n ? est pas couplée à un anticorps secondaire mais sur l ? anticorps primaire Ce dernier est spéci ?que anticorps monoclonal au bioagresseur ? Cette technique présente néanmoins un désavantage conséquent En e ?et il existe peu de sites de ?xation sur le bioagresseur donc peu d ? anticorps peuvent se lier Cela a pour conséquence de générer une faible intensité lumineuse Immuno uorescence indirecte ? Pour pallier aux problèmes d ? intensité lumineuse l ? immuno uorescence indirecte est préférée ? Dans cette technique un anticorps primaire monoclonal se ?xe sur le bioagresseur Ensuite un anticorps secondaire polyclonal qui possède une forte a ?nité pour l ? anticorps primaire est Cajouté Les anticorps primaires présentent di ?érents sites de ?xation Plusieurs anticorps secondaires peuvent donc s ? y lier ce qui décuple ainsi l ? intensité lumineuse ? C ? est aussi une technique moins onéreuse que l ? immuno uorescence directe Les anticorps primaires directement marqués par un uorochrome sont limités sur le marché et très chers Inconvénients Cette technique est rapide ?able et plutôt abordable en termes de coûts Cependant certains inconvénients existent ? Faux positif ou faux négatif le résultat obtenu n ? est pas conforme à la réalité Pour limiter les faux positifs un témoin négatif est e ?ectué avant analyse Pour ce faire les anticorps secondaires sont mis en présence du bioagresseur Après lavage il ne doit pas y avoir de uorescence émise En e ?et les anticorps secondaires n ? étant pas spéci ?ques au bioagresseur ils ne peuvent s ? y ?xer Néanmoins les analyses sont généralement doublées pour limiter les problèmes de faux résultats L ? obtention de deux résultats permet une comparaison ? Photo- blanchiment les molécules uorescentes utilisées peuvent arrêter d ? émettre de la uorescence et ainsi fausser les résultats L ? utilisation de matériel à haute résolution et haute sensibilité atténue ce phénomène ? Après les h d ? incubation un lavage est nécessaire a ?n éliminer toutes les molécules non ?xées Remarque Cette technique est très proche de la technique Elisa Il s ? agit de deux techniques de sérologies basées sur la reconnaissance antigène-anticorps le bioagresseur jouant le rôle d ? antigène La seule di ?érence entre elles est la révélation