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TRAVAUX PRATIQUES DE MICROBIOLOGIE ETUDE DES NON ENTEROBACTERIES 1. Présentatio

TRAVAUX PRATIQUES DE MICROBIOLOGIE ETUDE DES NON ENTEROBACTERIES 1. Présentation du TP 1.1 Objectifs du TP : - Etudes des non Entérobactéries. - Identification par Micro galeries API 20 NE. 1.2 Présentation de la micro galerie -Voir fiche technique. 2. Manipulation JOUR 1 : Analyser un mélange 1. Réaliser les observations microscopiques, Etat frais et Gram. 2. Réaliser un isolement sur : GTS et Drigalski. JOUR 2 : Identifier le germe. 3. Réaliser l’analyse des milieux de culture : GTS et Drigalski ensemencés le jour 1 • Compléter le tableau de la fiche de résultat. A partir du milieu Drigalski, 4. Réaliser un contrôle microscopique et le test enzymatique d’orientation afin de confirmer une non entérobactérie (Bacille Gram -, Oxydase +) • Compléter le tableau de la fiche de résultat. 5. Réaliser une suspension et effectuer les recherches suivantes : - Type Respiratoire, Voie d’Attaque du Glucose. - Ensemencer une gélose Ordinaire et une TCBS (voir doc annexe). - Ensemencer la micro galerie suivante : API 20 NE afin d’identifier votre germe. JOUR 3 : Identifier le germe. 6. Effectuer la lecture des résultats de la recherche de la voie d’attaque du glucose, du type respiratoire et des isolements. • Compléter le tableau de la fiche de résultat. 7. Effectuer la lecture de la galerie API 20 NE • Compléter la fiche de lecture. 8. Identifier le germe. JOUR 1 Etat Frais : - - Gram : - - JOUR 2 Analyse Macroscopiqe GTS DRIGALSKI TYPE 1 TYPE 2 Gram de contrôle : Test enzymatique d’orientation : Principe et conclusion JOUR 3 HUGH LEIFSON VF GO TCBS Lecture de la galerie API 20 NE : coller fiche API 20 NE Identification : ……………………………………………. T.C.B.S. Thiosulfates Citrate Bile Saccharose Composition : Peptone 10 g Extrait de levure 10 g Saccharose 20 g Citrate de sodium 10 g Citrate de fer III 1 g Bile de Bœuf 8 g BBT 40 mg Bleu de thymol 40 mg Thiosulfate de sodium 10 g Chlorure de sodium 10 g Agar 14 g pH= 8.6 Rôle : Permet l’isolement des Vibrio cholerae v Les colonies jaunes : ……………………………… Les colonies bleues vertes : ……………………….. Centre noir H2S + Pas de centre noir H2S - Les Vibrio cholerae apparaissent sous forme de …… ………………………………………………... T.C.B.S. Thiosulfates Citrate Bile Saccharose Composition : Peptone 10 g Extrait de levure 10 g Saccharose 20 g Citrate de sodium 10 g Citrate de fer III 1 g Bile de Bœuf 8 g BBT 40 mg Bleu de thymol 40 mg Thiosulfate de sodium 10 g Chlorure de sodium 10 g Agar 14 g pH= 8.6 Rôle : Permet l’isolement des Vibrio cholerae v Les colonies jaunes : ……………………………… Les colonies bleues vertes : ……………………….. Centre noir H2S + Pas de centre noir H2S - Les Vibrio cholerae apparaissent sous forme de …… ………………………………………………... TP 25 – Vibrio – Bacilles Gram- Oxydase+ 1 – Ecologie : 1.1 – Habitat : Ceux sont des bactéries de l’eau. Elles sont saprophytes. βie halophiles et halotolérantes. 1.2 – Pouvoir pathogène : Quelques espèces ont un pourvoir pathogène, certaines chez l’Homme d’autres chez les animaux aquatiques (poissons). L’espèce la plus connue comme pathogène est Vibrio cholerae qui est l’agent du choléra responsable de pandémies (Épidémie qui s'étend à la quasi-totalité d'une population) sur plusieurs continents. C’est une TI intestinale transmise par l’eau de boisson, les légumes crus, les fruits. Cette pathologie se manifeste par des vomissements et des diarrhées abondantes. La perte d’eau conduit à une déshydratation intense et rapide ce qui entraîne la mort en 2 ou 5 jours. Le pouvoir pathogène des vibrions s’explique par leur toxine cholérique qui agit au niveau de l’intestin grêle. Cette toxine stimule la sortie d’eau au niveau des entérocytes. 2 – Morphologie et particularités : Bacilles Gram-, oxydase+, très mobiles grâce à un flagelle polaire (donc déplacement rectiligne), aérobie stricte et métabolisme oxydatif. Bacilles généralement incurvés en virgule, fins. Ce sont des bactéries non exigeantes et très tolérantes vis-à-vis des conditions de culture (NaCl). Croissance stimulée à pH alcalin : 7,6-9 La croissance peut s’effectuer sur gélose sélective des Entérobactéries. 3 – Critères d’identification : 3.1 – Gélose TCBS : Milieu riche Peptone 10 g…………………………………….Milieu riche Extrait de levure 10 g…………………………………… Saccharose 20 g……………………………..source C et energie Citrate de sodium 10 g………………..……..Inhibiteur (forte concentration) Citrate de fer III 1 g………………..……..Révélateur de la production d’H2S Bile de Bœuf 8 g………………..……..Inhb Flore Gram + BBT 40 mg………………..……..Indic Variation de pH Bleu de thymol 40 mg………………..…….. Indic Variation de pH Thiosulfate de sodium 10 g………………..……..Précurseur d’H2S Chlorure de sodium 10 g………………..……..Inhibiteur et source de Minéraux Agar 14 g pH= 8.6 …………………………………………….sélection Vibrio Rôle Permet l’isolement des Vibrio cholerae Les colonies jaunes : Saccharose + Les colonies bleues vertes : Saccharose – Centre noir H2S + Pas de centre noir H2S - Les Vibrio cholerae apparaissent sous forme de colonies jaunes (S+) sans centre noir (H2S-). 3.2 – API 20 NE : Voir documents fournis. Le Choléra Le choléra est une toxi-infection entérique épidémique contagieuse due à Vibrio cholerae, ou bacille virgule, découvert par Koch en 1883, et caractérisée par des diarrhées banales ou cataclysmiques. La forme majeure classique est fatale dans plus de la moitié des cas, en l’absence de traitement (de quelques heures à trois jours). La contamination est orale, d’origine fécale, par l’eau de boisson ou des aliments souillés. Le choléra a été la première maladie pestilentielle à faire l’objet, dès le XIXe siècle , d’une surveillance internationale. Répartition géographique du choléra : ♦ endémique ♦ sporadique En France, on compte quelques cas de choléra chaque année ; dans la plupart des cas, la maladie a été contractée à l'étranger, on a dénombré cinq cas de choléra autochtone entre 1970 et 1996. 1 - Principales épidémies : La première description historique par un Européen est faite en 1503 par un officier de Vasco de Gama, qui décrit une épidémie de diarrhées cataclysmiques rapidement mortelles (en 8 heures) et provoquant 20000 morts à Calicut (Inde). Limitées initialement à l'Asie (Inde, Chine et Indonésie), les épidémies se développent au XIXe siècle en véritables pandémies qui atteignent le Moyen-Orient, l'Europe et les Amériques. Il y a eu 7 pandémies recensées et c'est en Afrique, où le choléra sévit désormais de façon endémique, que la situation est la plus préoccupante aujourd'hui. 2 - Prévention contre le choléra : Il existe un vaccin dont l'efficacité est loin d'être absolue et qui n'est obligatoire dans aucun pays. Ce vaccin est commercialisé en France à destination des voyageurs. Dans les zones endémiques, la prévention du choléra consiste essentiellement en des mesures d'hygiène, et notamment empêcher le croisement de la chaîne alimentaire avec la chaîne des excréments. En ce qui concerne la nourriture, il convient d'utiliser une eau saine pour l'hygiène, la boisson et le lavage des aliments. 3 - Diagnostic et thérapie : Dans les cas bénins, le choléra se manifeste par une entérite, qui n'est en général pas diagnostiquée comme étant le choléra. Il se manifeste de manière aiguë par des vomissements ainsi que des diarrhées liquides abondantes et fréquentes (50 à 100 par jour), qui entraîne une déshydratation ainsi qu'une perte de sels minéraux et une augmentation de l'acidité du sang. Les selles sont incolores et inodores (aspect « d'eau de riz »). Dans les cas graves, cette modification métabolique peut entraîner la mort en un jour ou deux. Le diagnostic exact se fait par culture de germes à partir de selles. Le traitement consiste essentiellement en une réhydratation, qui maintient le patient en vie le temps qu'il guérisse spontanément en quelques jours. La réhydratation est si possible associée à des antibiotiques. uploads/s3/ seance-18-les-vibrio.pdf