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REACTION DE COOMBS 24 OBJECTIFS EDUCATIONNELS 1- Définir la réaction de Coombs

REACTION DE COOMBS 24 OBJECTIFS EDUCATIONNELS 1- Définir la réaction de Coombs et expliquer son principe. 2- Citer les deux types de test de Coombs et préciser leurs indications respectives. 3- Citer les différents types d’antiglobulines 4- Expliquer les techniques du test de Coombs LA REACTION DE COOMBS 1- INTRODUCTION C’est une méthode d'agglutination artificielle. Le plus souvent, les anticorps irréguliers sont non agglutinants, c'est-à-dire qu'ils se fixent bien à la surface des globules rouges possédant l'antigène correspondant à leur spécificité, cette fixation n'est cependant pas suivie d'une agglutination. On dit que les globules rouges, ainsi recouverts d'anticorps mais non agglutinés, sont "sensi- bilisés". Le test de Coombs est l'une des méthodes qui nous permet de mettre en évidence cette sensibilisation. C’est une technique d’agglutination artificielle à l'aide d'un réactif particulier : l'antiglobuline ou anticorps anti-anticorps. 25 2- LES DIFFERENTS TESTS DE COOMBS Il existe deux types de test de Coombs : direct et indirect 2-1- La réaction de Coombs direct : test globulaire Elle met en évidence les anticorps fixés sur les globules rouges "in vivo". Dans ce cas, on va tester les globules rouges du patient avec l’antiglobuline. La sensibilisation in vivo des globules rouges va se manifester par une réaction d’agglutination (figure 1). Figure 1 : Test de Coombs direct Elle sera donc utilisée pour : a) démontrer la sensibilisation des globules rouges du nouveau-né au cours de la maladie hémolytique du nouveau-né (M.H.N.N) : les hématies du nouveau-né sont sensibilisées par des anticorps anti-érythrocytaire d’origine maternelle ayant traversé la barrière placentaire 26 b) mettre en évidence la sensibilisation, par des auto-anticorps ou des fractions du complément, des globules rouges des malades atteints d’anémie hémolytique autoimmune c) dépister les anémies hémolytiques immuno-allergiques dus à certains médicaments où les globules rouges sont sensibilisés par des anticorps dirigés contre le médicament en cause (Pénicilline, Rifampicine). Dans ce cas, le test de Coombs n’est positif qu’en présence du médicament. d) dans les cas d'accidents transfusionnels, pour démontrer la fixation sur les globules rouges du donneur, en circulation chez le malade, d'allo-anticorps spécifiques présents dans le sérum du malade. 2-2- La réaction de Coombs indirect : test sérique Elle met en évidence la présence d'anticorps dans un sérum en mettant ce dernier en contact "in vitro" avec les globules rouges et en présence de l’antiglobuline (figure 2) Figure 2 : Test de Coombs indirect 27 Elle sera donc utilisée pour : a) la recherche des anticorps anti-érythrocytaires irréguliers dans le sérum des femmes enceintes ou des malades transfusés ; b) les épreuves de compatibilité entre le sérum du receveur et les globules rouges du donneur, qui est en fait une recherche d'anticorps anti-érythrocytes personnalisée ; e) la détermination de certains groupes sanguins (Kell, Duffy, etc..) utilisant des réactifs non agglutinants. 3- LES DIFFERENTS TYPES D'ANTIGLOBULINES Les réactifs sont obtenus par immunisation d'animaux, en particulier le lapin et la chèvre ou par génie génétique (recombinant). Ils doivent être de type agglutinant (et non seulement précipitant comme pour une immunoélectrophorèse) ; c'est-à-dire que les réactifs doivent être capables d'agglutiner les globules rouges sensibilisés par des anticorps et lavés en milieu salin. Il existe deux types d’antiglobulines en fonction de leur spécificité antigénique : polyvalente ou spécifique. Les antiglobulines polyvalentes décèlent la fixation sur les globules rouges, d'immunoglobulines de type IgG et/ ou des fractions C3 et C4 du complément. Ce sont les antiglobulines le plus fréquemment utilisées en test de routine. A côté des antiglobulines polyvalentes, sont disponibles des antiglobulines spécifiques: anti-IgG, anti-complément (C3 + C4), anti-IgA, anti- IgM ; l'anti-complément lui-même se subdivise en réactifs purifiés reconnaissant soit le C3, soit le C3d, soit le C4, fixé sur les globules rouges. Ces réactifs spécifiques rares, extrêmement précieux pour certains laboratoires spécialisés, ne sont pas d'usage courant. 28 4- LES TECHNIQUES DE COOMBS 4-1- Les différentes techniques *Le Coombs direct est une technique globulaire qui s'opère sur des globules rouges lavés remis en suspension en eau physiologique. La technique peut se faire sur plaque ou en tube. 3 témoins sont nécessaires : * Témoin Salin (phy.) (Auto-Ac) * Témoin AB (polyagglutinabilité) * Témoin Sensibilisé (qualité de l’antiglobuline). *Le Coombs indirect est une technique sérique. On fait réagir le sérum sur un panel de cellules (hématies) de phénotypes connus. La technique se fait en tube et nécessite deux témoins : positif et négatif. 4-2- Les difficultés Simple à réaliser dans l'apparence, la réaction de Coombs nécessite d'être effectuée avec grand soin. Il s'agit d'une réaction précise dans laquelle chacun des éléments suivants compte : * concentration globulaire * lavage des globules rouges * propreté de la verrerie * qualité de l'antiglobuline * concentration correcte du réactif 29 QCM 1- La réaction de Coombs : a. Est une technique d’agglutination artificielle b. utilise l’albumine c. Permet de mettre en évidence des anticorps spontanément agglutinants d. Comporte deux techniques : directe et indirecte e. Est la technique clé pour la réalisation de l’épreuve de compatibilité au laboratoire Réponse : a, d, e 2- L’antiglobuline : a. Est un anticorps anti-anticorps b. Peut etre spécifique ou polyvalente c. L’antiglobuline anti-IgM est la plus utilisée d. Doit être bien conservée e. Est toujours d’origine animale Réponse : a, b, d Questions rédactionnelles 1- Définir la réaction de Coombs et expliquer son principe ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………. 30 2- Définir la réaction de Coombs direct ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………….... 3- Définir la réaction de Coombs indirect ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………. 4- Préciser les indications de la réaction de Coombs direct ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… 5- Préciser les indications de la réaction de Coombs indirect ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… 31 RECHERCHE D’ANTICORPS ANTI- ERYTHROCYTAIRES 3ème année Médecine Année universitaire 2018-2019 32 LA RECHERCHE DES ANTICORPS IRREGULIERS OBJECTIFS EDUCATIONNELS 1- Préciser le principe de la recherche des anticorps anti-érythrocytaires (RAI) 2- Citer les indications de la RAI 3- Expliquer les 4 impératifs pour le bon déroulement de la RAI 4- Préciser les limites de la RAI 1 - PRINCIPE La recherche d'anticorps anti-érythrocytaires (RAI pour recherche d’anticorps irréguliers ou d'Ac dits incomplets) et un examen clé de l’immunohématologie permettant d’assurer la sécurité immunologique des transfusions et le suivi immunohématologique de la femme enceinte. Elle consiste à mettre en évidence l'existence éventuelle, dans le sérum ou le plasma du patient, d'un ou plusieurs Ac au moyen d'une gamme d'hématies de groupe O et de phénotype connu appelées hématies détectrices ou "panel". Elle comporte deux étapes : une étape de dépistage suivie, en cas de positivité, par une étape d’'identification de la spécificité du ou des Ac détectés qui permettra de sélectionner le phénotype du sang à transfuser. 2 - CONDITIONS ET IMPERATIFS Quatre règles principales doivent être soigneusement appliquées lors d'une RAI, sinon le résultat sera illusoire car incertain. 2-1- Il faut un bon panel. Plusieurs types de panels peuvent être utilisés selon le niveau de l'étude sérique. 33 * Le dépistage : Se fait grâce à un panel réduit de dépistage, composé de 2 à 4 hématies tests soigneusement sélectionnées. Ce panel permet de dépister les Ac correspondant aux Ag qu'il comporte à savoir = D, C, c, E, e, Kell, cellano, M, N, S, s, P1, Lea, Leb, Fya, Fyb, Jka, Jkb Lua, Lub. Il ne permet pas non plus d'identifier le ou les Ac qu'il dépiste. La seule réponse qu'il peut donner, c'est la présence d'Ac irréguliers dans le sérum pour les Ag sus-décrits. * L'identification : Lorsque le dépistage est positif, une identification est nécessaire. Elle utilise un panel d'identification officiellement défini et comportant 10 échantillons. Cette identification consiste à trouver la correspondance entre la distribution des réactions positives ou négatives observées et la présence ou l'absence d'un Ag quelconque. En dehors d'une validation statistique (méthode exacte ou test du chi2 «X2») l'identification n'a aucune valeur. Parfois, 10 échantillons d'hématies ne suffisent pas pour identifier un Ac. Le nombre suffisant peut être réalisé par les panels de 2 semaines consécutives, si le 1er est correctement conservé. - * Le panel de référence et autres panels particuliers : Le schéma N°1 résume le déroulement global de la RAI. 34 Schéma 1 : Déroulement de la RAI 2-2- Il faut un éventail de techniques : - saline 22 ° C ou 4° C - - enzymes : broméline, papaïne, ficine, ... - Coombs indirect normal - Coombs indirect en LISS : low ionic strength solution (ou BFI : solution de basse force ionique). L'abaissement de la force ionique du milieu accélère la cinétique de fixation de l’Ac - Coombs indirect utilisant des hématies-tests traitées par la trypsine (Coombs trypsiné). - Coombs trypsiné en LISS - des techniques automatiques (auto-analyseur) permettent également la détection d'Ac irréguliers. Toute cette diversité de techniques provient de notre ignorance totale du comportement de l'Ac éventuellement présent dans le sérum étudié. Cet Ac peut être agglutinant ou non, actif à + 4°C ou à + 37°C, détectable par des hématies traitées par des enzymes ou seulement par Coombs indirect ou les 2 à la fois. En effet, toutes les uploads/Finance/ c9-c10-c11-c12-reaction-de-coombs.pdf