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Coloration de Ziehl-Neelsen modifiée I) Réalisation - Dépôt d'une goutte de cul

Coloration de Ziehl-Neelsen modifiée I) Réalisation - Dépôt d'une goutte de culot de Ritchie sur une lame - Séchage à l'air - Fixation au méthanole pendant 2 à 5 min - Séchage - Coloration à la fuschine (filtrée) pendant 1h30 - Rinçage à l'eau - Différenciation par une solution d'acide sulfurique à 2% : 15-20 secondes - Rinçage à l'eau - Coloration de fond par une solution de vert malachite pendant 15 min - Rinçage à l'eau - Séchage à l'air - Lecture au grossissement x 250 (objectif x25) II) Intérêt Cette coloration permet d'observer les oocystes de cryptosporidies qui sont colorés en rose sur fond vert. Coloration de Weber I) Réalisation Faire une suspension de selles fraîches (et vortexer) Filtrer à l'aide d'un porte filtre fixé sur un tube Falcon Etaler 10µL sur une lame Laisser sécher à l'air Fixer le frottis dans du méthanol pendant 5 min Colorer au trichrome modifié pendant 90 min Rincer 10 secondes avec de l'acide-alcool (4,5 ml d'acide acétique + 995,5 ml d'alcool à 90%) puis rincer brièvement avec de l'alcool à 95% Déshydrater le frottis successivement dans de l'alcool à 95% pendant 5 min puis dans de l'alcool absolu pendant 10min et dans du xylène pendant 10 min Laisser sécher à l'air Lire pendant 10 min au microscope optique (grossissement x1000, objectif 100 à l'immersion) II) Intérêt Coloration utilisée pour mettre en évidence des spores de Microsporidies : - 1-5µm, coloration rose bipolaire sur fond bleu uploads/Finance/ i-realisation-coloration-de-ziehl-neelsen-modifiee.pdf