Ft 6 denombrement coliformes blbvb

Mme Abdellaziz épouse Zemmal Akila M A A FSB USTHB FICHE TECHNIQUE N Dénombrement des coliformes sur milieu liquide BLBVB par la technique du NPP BLBVB Bouillon Lactosé Bilié au Vert Brillant Utilisation Milieu sélectif pour le dénombrement des coliformes totaux et fécaux dans l ? eau et les produits alimentaires Composition Pour litre de milieu o Tryptone g o Bile de b ?uf bactériologique agent sélectif g o Vert brillant agent sélectif mg o Lactose g o pH du milieu prêt-à-l ? emploi à C Principe La présence simultanée de deux agents sélectifs la bile de boeuf et le vert brillant assure l ? inhibition des bactéries Gram positif et sélectionne les bactéries Gram négatif les coliformes La fermentation du lactose avec production de gaz se manifeste par une turbidité et la présence de gaz dans la cloche de Durham Le test se réalise en deux étapes le test présomptif pour le dénombrement des coliformes totaux suivi par le test con ?rmatif pour le dénombrement des coliformes fécaux ou thermo tolérants E coli Technique voir schéma ? Test présomptif Préparation des dilutions décimales voir ?che technique Ensemencement Transférer ml de la solution mère et de ses dilutions dans un tube contenant ml du milieu BLBVB avec cloche de Durham Bien homogénéiser le tube et s ? assurer que la solution est bien répartie y compris sous la cloche Evacuer les bulles d ? air de la cloche pour éviter d ? avoir de faux négatifs Pour chaque dilution une répétition de ou tubes est e ?ectuée CMme Abdellaziz épouse Zemmal Akila M A A FSB USTHB Incubation les tubes sont incubés pendant ?? h à ?? C Lecture un test positif se manifeste par un trouble ET la production de gaz visible gr? ce à la présence d ? air sous la cloche de Durham Dénombrement le dénombrement se fait par la technique du nombre le plus probable NPP Annoter tous les tubes positifs par Pour chaque dilution a ?ecter un chi ?re égal à la somme des tubes positifs Déterminer le nombre caractéristique Pour une répétition de trois tubes choisir le plus grand nombre inférieur à pour une répétition de quatre tubes choisir le plus grand nombre inférieur à ? ? ? Déterminer le nombre le plus probable npp correspondant au nombre caractéristique par lecture directe sur la table de Mac Grady En déduire la concentration en coliformes N npp x V x D le résultat est exprimé en nombre de coliformes totaux ml ou gr N le nombre de coliformes totaux npp nombre le plus probable V le volume ensemencé D la plus grande dilution de la série choisie pour le nombre caractéristique ? Test con ?rmatif A partir de chaque tube positif ensemencer deux tubes un tube contenant du BLBVB ET un tube contenant de l ? eau peptonée exempte d ? indole Incubation les tubes sont incubés pendant ?? h à C Lecture un test positif se manifeste par le trouble et la production de

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