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Isoloment Introduction Techniques d ? isolement Pour étudier les microorganismes il est indispensable de les isoler et d'en faire une culture pure Deux techniques sont alors utilisées La méthode des stries La méthode des dilutions - Méthode des stries ??

Introduction Techniques d ? isolement Pour étudier les microorganismes il est indispensable de les isoler et d'en faire une culture pure Deux techniques sont alors utilisées La méthode des stries La méthode des dilutions - Méthode des stries ?? Cas d'un ensemencement en surface à partir d'un prélèvement liquide ou solide -Prendre les précautions habituelles pour un ensemencement N ? ouvrir que le temps nécessaire à l'exécution des stries et n'entreb? iller alors la boite que devant un bec Bunsen -porter l'anse au rouge dans la amme du bec la laisser refroidir dans la zone stérile et avec l'autre main entrouvrir la boite de culture solide ou le tube liquide - prélever une colonie ou une goutte de suspension avec l'anse refermer la boite ou le tube et prendre la boite vierge - ensemencer de la façon suivante -Partir de en ensemençant selon le sens des èches jusque vers Flamber l'anse la laisser refroidir et repartir perpendiculairement à la direction précédente - jusque vers -les boites de Pétri sont mises en position renversée à l'étuve à C Observer après à heures selon le cas la position renversée permet à l'eau de condensation de S ? évaporer Résultats obtenus Après l ? incubation à C C - Méthode des dilutions Cas d'un ensemencement en surface par étalement d'un milieu liquide Cette technique permet après un étalement sur milieu solide d'évaluer le nombre de colonies par ml de suspension Elle peut permettre également si l'on ne dispose pas de lame à numération la détermination du nombre de cellules par unité de volume ou du nombre de cellules présentes dans une colonie -Les dilutions sont faites dans de l'eau distillée ou dans un liquide physiologique de type Ringer -Numéroter des tubes à essai de à chaque tube contient ml de liquide de dilution -Dans le tube à l'aide d'une pipette stérile ajouter ml de la suspension fournie rincer la pipette trois fois - homogénéiser par aspirations successives et sou er la dilution en prélever ml et verser dans le tube Ainsi de suite jusqu'à l'obtention de la dilutionn f tlf Méthode autre photo CIsolement des souches Puri ?cation des souches Après h d ? incubation les cultures sont puri ?ées Celle-ci qui permet d ? obtenir des cultures pures à partir de souches obtenues La sélection est basée sur l ? aspect macroscopique des colonies la couleur la forme le diamètre l ? opacité ? Un échantillon de chaque type de colonie est prélevé ensuite puri ?é par repiquage successif selon la méthode de stries Austin Conservation des souches Les souches isolées sont conservées dans des tubes à essai contenant un milieu GN incliné annexe Les souches sont ensemencées sur la pente des tubes par la méthode des stries puis incubées à C pendant heures Les tubes dans lesquels il y a eu u ne croissanceseront conservés à C pour une durée de à semaines A ?n de pouvoir toujours disposer de souches viables la réactivation doit se faire tous les mois Marchal