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Interro micro TP Isolement et puri ?cation d ? entérobactérie à partir d ? un échantillon de sol Micro ore de sol contient des bactéries archaebactéries champignons levures moisissures algues et protozoaires L ? isolement consiste à réaliser à partir d ?

TP Isolement et puri ?cation d ? entérobactérie à partir d ? un échantillon de sol Micro ore de sol contient des bactéries archaebactéries champignons levures moisissures algues et protozoaires L ? isolement consiste à réaliser à partir d ? un échantillon des suspensions-dilutions Ces dernières sont ensemencées sur milieu de culture solide Au terme d ? incubation les germes contenus dans le sol seront développés Chaque germe sera à l ? origine d ? une colonie le comptage des colonies permet par méthode de calcul simple d ? estimer la quantité de germes contenue dans le sol étudié L ? utilisation d ? un milieu sélectif comme le milieu EMB permettra le criblage des bactéries à Gprésentes dans l ? échantillon de sol leur isolement et leur puri ?cation Isoler sélectionner choisir mettre à part un microorganisme pour faire une étude recherche Milieu EMB Il permet le criblage des bactéries à Gram- entérobactéries - Il va servir à la présélection des souches isolées d ? entérobactéries Milieu sélectif pour les entérobactéries - Il contient inhibiteurs des Gram- Défavorise la croissance des Gram sont éliminés Milieu GN incliné Milieu standard - Favorable pour tous les microorganismes - Il va servir à une multiplication non sélective des bactéries Entérobactérie AAF Gram - bacille mobile catalase oxydase - Les étapes PECDEDL - Isolement primaire - Prélèvement pour déterminer la ore présente dans le sol on va fait de prélèvement d ? un échantillon de terre a ?n de limiter l ? apport d ? autres contaminants Il faut maintenir des conditions stériles - Extraction préparation de la solution mère suspension bactérienne deux fois g g dans le four pasteur pour déterminer le poids sec g dans un mortier avec mL de l ? eau physiologique ?? broyer ?? mettre dans l ? éprouvette ?? compléter l ? éprouvette à mL ?? vortexer - Calcul du poids sec on place une masse au fout pasteur pendant un temps minimum de h à On s ? a ?ranchira du taux d ? hydratation de la terre qui varie en fonction des conditions atmosphériques et du lieu de prélèvement Ceci est nécessaire pour comparer des échantillons prélevés à des lieux di ?érents puisqu ? on ne prend plus en compte que la masse de terre sèche Pour être homogène il y a di ?érence d ? humidité déshydrater de l ? échantillon C- Dilutions pour diminuer la charge On n ? utilise pas la solution mère parce qu ? elle est riche et pleine de microorganisme dans l ? ensemencement elles vont former un tapis de - à - transférer mL de la suspension préparée Dans le premier tube contenant mL d ? eau physiologique qui constitue la dilution - Ensemencement un étalement de mL sur les milieux Le milieu GN o Milieu standard classique o Permet la croissance de toutes les bactéries o Va servir à une multiplication non sélective des bactéries Le milieu EMB o Milieu sélectif pour les entérobactéries parce qu ?