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Td genetique bacterienne 2

TD GÉNÉTIQUE BACTÉRIENNE Exercices et solutions I - TAUX DE MUTATION Soit une culture d'E coli sensible à la streptomycine dont la dilution - étalée à raison de ml sur un milieu gélosé en bo? te de Pétri donne après incubation colonies ml de cette culture est étalé sur un milieu gélosé additionné d'un antibiotique la streptomycine à une dose supérieure à la CMI Après incubation la bo? te de Pétri montre colonies Quel est le taux de mutation des résistants à la streptomycine L ? opération e ?ectuée consiste à étaler un volume de ml de la dilution - d ? une culture d ? E coli sur de la gélose nutritive Après incubation nous avons compté colonies dans la boite ensemencée Cette opération va nous permettre de déterminer le titre ou la concentration bactérienne de la culture d ? E coli C C colonies x facteur de dilution UFC ml UFC ml Lorsqu ? on a étalé ml de la culture non diluée d ? E coli UFC sur de la gélose nutritive additionnée de la streptomycine à une concentration supérieure à la CMI GN Stp nous avons obtenu après incubation colonies Quel est le phénotype de ces quatre colonies Les quatre colonies sont des E coli résistant à la streptomycine Cette résistance est apparue spontanément au sein de la population analysée UFC Quel est le taux de mutation des résistants à la streptomycine Tm Nombre de mutants nombre total des individus composant la population analysée Tm UFC UFC Tm x - NB le taux de mutation est sans unité La culture initiale est traitée par un agent mutagène la nitrosoguanidine puis étalée comme précédemment à raison de ml sur le même milieu gélosé à la streptomycine GN Stp Après incubation la bo? te de Pétri montre colonies Calculez le taux de mutation Tm des résistants Comparez cette valeur à celle trouvée précédemment et conclure COn appelle agent mutagène tout facteur qui peut entra? ner une mutation Il peut s'agir d ? un facteur physique radiations ionisantes par ex ou chimique ex nitroso-guanidine Dans cette deuxième opération nous avons traité la culture d ? E coli Stp S par un agent mutagène chimique la nitroso- guanidine Ensuite ml de la culture traitée est étalé sur gélose nutritive streptomycine GN Stp Après incubation nous avons dénombré colonies Combien de germes bactériens traités à la nitroso-guanidine a t-on déposé sur la GN Stp Réponse nous avons déposé ml de la culture non diluée d ? E coli c ? est à dire un nombre équivalent à UFC Quel est le taux de mutation Tm après traitement à la nitroso-guanidine Tm Tm x - On remarque que Tm Tm Au niveau de la dernière expérience nous avons en plus des mutants spontanés d ? autres mutants induits ? par l ? agent mutagène La nitroso-guanidine a augmenté la probabilité des modi ?cations de l ? ADN et par conséquent le nombre de bactéries devenues résistantes à la streptomycine II MUTANTS DÉFICIENTS