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Cours 5 Module Techniques d ? analyses microbiologiques Préparé par Dr NAS Fatima Ep RABEHI CCour Techniques récentes de numération techniques rapides spectroscopiques électrochimiques autres procédés C Techniques récentes de numération Introduction ? Les

Module Techniques d ? analyses microbiologiques Préparé par Dr NAS Fatima Ep RABEHI CCour Techniques récentes de numération techniques rapides spectroscopiques électrochimiques autres procédés C Techniques récentes de numération Introduction ? Les méthodes classiques de culture et de dénombrement sont peu coûteux mais nécessite la croissance des microorganismes a ?n qu ? ils soient détectés par l ? ?il humain ? Les délais d ? obtention des résultats sont longs minimum jours pour un test de dénombrement de germes Durant cette attente de résultats la production peut être arrêtée ou face aux besoins de productivité de l ? industrie des lots sont engagés à risque C ? est-àdire que des lots potentiellement contaminés continuent leur processus de fabrication ? Aujourd ? hui de nouvelles méthodes microbiologiques rapides sont disponibles et permettent de répondre au besoin de réactivité des entreprises C Techniques récentes de numération Techniques spectroscopiques a Réduction des colorants ? Le principe repose sur la réponse d ? un colorant redox à la présence de microorganismes métaboliquement actifs qui se traduit par un changement de couleur ? Deux colorants sont couramment utilisés pour estimer le nombre de microorganismes viables le bleu de méthylène passe du bleu au blanc et la résazurine qui a été utilisée dans des contrôles des laits et les viandes fraiches et hachées Ce colorant est réduit et passe du bleu au rose à l'incolore ? Le temps nécessaire à la décoloration peut être mesuré pour évaluer le nombre de microorganismes viables ? L ? appréciation de la décoloration s ? e ?ectue généralement à l ? ?il ou à l ? aide d ? un spectrophotomètre C Techniques récentes de numération b Mesure d ? activités enzymatiques ? La technique des colorants redox repose sur l ? évaluation de l ? activité de la réductase cependant de nombreux autres enzymes ont été utilisés pour détecter et évaluer la présence des microorganismes c ? était le cas des phosphatases estérases pour évaluer le nombre des bactéries viables dans le lait viandes et le poissons et la glutamate décarboxylase pour évaluer le nombre d ? E coli dans le lait C Techniques récentes de numération c ATP-métrie réaction de bioluminescence ? L ? Adénosine Triphosphate ATP est un marqueur de viabilité cellulaire l ? ensemble des cellules vivantes stocke de l ? énergie sous forme d ? ATP La présence d ? ATP dans un échantillon revient à détecter des microorganismes vivants ? La technique de l ? ATP-métrie consiste à doser l ? ATP utilisant le complexe ATPluciférine-luciférase ? Certains microorganismes peuvent émettre de la lumière suite à l'activité de la luciférase sur la luciférine La réaction nécessite la présence de Mg et de l'ATP qui facilite la formation du complexe ATP-luciférine-luciférase C Techniques récentes de numération ? En présence d ? oxygène ce complexe est oxydé donnant l'oxyluciférine dans un état excité ensuite retourne à l'état stable et libère un photon de lumière La réaction de bioluminescence ? La quantité de lumière émise étant proportionnelle