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Quantification des methabolites secondaires

Procédure de dosage et la quanti ?cation des alcalo? des avono? des et polyphénols totaux Dosage des polyphénols Le dosage des polyphénols a été réalisé selon la méthode décrite par Vermerius et Nicholson en ml de l ? extrait brut méthanolique est mélangé avec ml d ? une solution de carbonate de sodium à fra? chement préparée le tout est agité par un vortex Vermerris et al Après cinq minutes ?l du réactif de Folin- Ciocalteu N sont ajoutés au mélange le tout est laissé pendant minutes à température ambiante et la lecture est e ?ectuée contre un blanc à l ? aide d ? un spectrophotomètre Perkin Elmer Lambda Spectrophotomètre à nm Une courbe d ? étalonnage est réalisée en parallèle dans les mêmes conditions opératoires en utilisant l ? acide gallique comme contrôle positif Les résultats sont exprimés en milligramme équivalent acide gallique par gramme de la matière végétale sèche mg GAE g Dosage des avono? des Le dosage des avono? des a été réalisé selon la méthode colorimétrique décrite par Ardestani et Yazdanparast Ardestani et al Cinq cents microlitres de l ? extrait brut méthanolique sont mélangés avec ml d ? eau distillée suivis de ?l d ? une solution de nitrite de sodium NaNO à Après six minutes ?l de chlorure d ? aluminium AlCl H O à sont ajoutés au mélange le tout est laissé pendant six minutes Ensuite ml d ? hydroxyde de sodium à sont ajoutés aux tubes et le volume ?nal est complété immédiatement à ml Après minutes la lecture est faite à nm contre un blanc à l ? aide d ? un spectrophotomètre Une courbe d ? étalonnage est réalisée en parallèle dans les mêmes conditions opératoires en utilisant la catéchine comme contrôle positif Les résultats sont exprimés en milligramme équivalent catéchine par gramme de la matière végétale sèche mg CEQ g Protocole Alcalo? de Le PH étant maintenu à - par dilution avec le HCL ajouter mL d ? extrait Ajouter ml de réactif de dragendorf et soumettre le précipité formé à la centrifugation Laver le précipité avec de l ? alcool éliminer le ?ltrat et traiter le résidu avec ml de solution de sulfure dis sodique Centrifuger ensuite le précipité noir brun? tre formé Dissoudre le résidu dans mL d ? acide nitrique concentré avec réchau ?ement si nécessaire CDiluer la solution obtenue à mL dans un ballon standart avec de l ? eau distillée Pipeter mL de cette solution et mL de solution de thiouré L ? absorbance étant maintenu à nm contre l ? ébauche contenant l ? acide nitrique et thiouré Les valeurs de l ? absorbance multipliées par le facteur donnent la quantité de bismuth Le facteur étant obtenu à partir de la courbe standart C