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Cours 2 techniques detude des cellules

Département des Troncs Communs Sciences de la Nature Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie Université Abderrahmane Mira de Bejaia Cours Techniques d ? étude des cellules Année universitaire - Méthodes d ? analyse microscopique ? ?? Microscopie optique ? ?? Microscopie électronique - Techniques d ? isolement des organites ? ?? Centrifugation di ?érentielle ? ?? Centrifugation sur gradient de densité - Méthodes histochimiques ou cytochimiques ? ?? Mise en évidence des polysaccharides réaction à l ? acide périodique de Schi ? P A S ? ?? Mise en évidence de l ? ADN réaction de Feulgen - Méthodes immunocytochimiques ? ?? Molécules uorescentes ? ?? Enzymes ?? Dé ?nition et principe - ?? Ensemble de techniques permettant d ? obtenir une image de structures biologiques - ?? Une onde photons électrons est envoyée sur la préparation ou émise par la préparation Cette onde est captée par un objectif qui la concentre et par un oculaire qui crée une image observable ?? Principe et fonctionnement - ?? Fondée sur l ? utilisation de la lumière et de lentilles optiques - ?? Permet l ? observation d ? éléments non visibles à l ? ?il nu - ?? Source lumineuse fournie par une lampe - ?? C o n c e n t r é e p a r u n e l e n t i l l e l e condenseur - ?? La lumière traverse le spécimen puis une autre lentille appelée objectif grossit le spécimen - ?? Visualisée à travers une lentille oculaire ?il Oculaire Objectif Spécimen Condenseur Source lumineuse ?? Exemples d ? observation Cellules végétales Élodée Cellule de la muqueuse buccale Nucléole Paroi de cellules Lamelle moyenne Enveloppe nucléaire Chloroplaste ?? C e s m i c r o s c o p e s p e r m e t t e n t d ? observer des objets non préalablement colorés par exemple des cellules vivantes - ?? A quand des ondes lumineuses traversent des objets colorés leur amplitude est diminuée c ? est ce qui crée l ? image - ?? B quand les ondes lumineuses traversent un objet non coloré leur amplitude est peu changée mais leur phase est modi ?ée ce qui crée des interférences Les e ?ets de ces interférences sont exploités pour créer une image dans les microscopes à contraste de phase A Lumière incidente B Lumière incidente Ondes en phase Cellule colorée Phase modi ?ée Cellule non colorée ?? Exemples d ? observation Cellules de l ? épiderme d ? oignon Cellule de la muqueuse buccale ?? Ce microscope permet d ? observer des éléments uorescents naturels comme la chlorophylle ou bien marqués par une sonde spéci ?que couplée à un uorochrome dans une cellule ?? L ? objet est excité par une lumière de longueur d ? onde ? dé ?nie par un ?ltre ?? A p r è s e x c i t a t i o n d e