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Chapitre 5 techniques d x27 etudes des molecules inductrices 1

Chapitre Contrôle du développement embryonnaireIdenti ?cation des molécules impliquées dans l ? induction du mésoderme ? Méthodes pour identi ?er les molécules inductrices ? Méthodes pour localiser les molécules inductrices ?? Hybridation moléculaire basée sur la propriété d ? appariement entre les bases complémentaires de l ? un des deux brins de la molécule d ? ADN et de celles de l ? ARNm ?? Immunodétection réalisée sur des coupes histologiques EXERCICE DE RECHERCHE En quoi consiste chacune des deux techniques Fiche d ? une page pour chaque technique CChapitre Contrôle du développement embryonnaire Identi ?cation des molécules impliquées dans l ? induction du mésoderme ? Méthodes pour identi ?er les molécules inductrices ? Méthodes pour tester les fonctions des molécules inductrices ?? Réalisée lorsque la molécule a été localisée au bon endroit ?? In vitro Exp a Cellules compétentes de la calotte animale en culture en présence de la molécule à tester - Analyses histologiques observation de cellules du mésoderme - Analyses moléculaires pour observer des marqueurs spéci ?ques protéines ou ARNm du mésoderme ventral ou dorsal CChapitre Contrôle du développement embryonnaire Identi ?cation des molécules impliquées dans l ? induction du mésoderme ? Méthodes pour identi ?er les molécules inductrices ? Méthodes pour tester les fonctions des molécules inductrices ?? Réalisée lorsque la molécule a été localisée au bon endroit ?? In vivo Exp b et c soit expériences de perte de fonction sousexpression ou de gain de fonction surexpression de la molécule Soit rendre la protéine inactive et analyser les phénotypes générés - Cibles éléments manipulés ADN ou ARNm ou protéine - Modi ?cation de l ? ADN ?? protéine mutée inactive ou absente Méthode Knock-out KO CChapitre Contrôle du développement embryonnaire Identi ?cation des molécules impliquées dans l ? induction du mésoderme ? Méthodes pour identi ?er les molécules inductrices ? Méthodes pour tester les fonctions des molécules inductrices ?? Réalisée lorsque la molécule a été localisée au bon endroit CChapitre Contrôle du développement embryonnaire Identi ?cation des molécules impliquées dans l ? induction du mésoderme ? Méthodes pour identi ?er les molécules inductrices ? Méthodes pour tester les fonctions des molécules inductrices ?? Pour b c ? est une expérience de perte de fonction qui consiste à obtenir la dégradation de l ? ARNm d ? une protéine en fournissant à l ? embryon ou à la cellule des ARN antisens ARN interférent ou des oligonucléotides antisens ADN - Il se forme des duplex ARN-ARNm ou Adn- ARNm qui seront dégradés dans la machinerie cellulaire donc pas de production de la protéine ?? Autre possibilité pour b blocage de la traduction de l ? ARNm cible injection de morpholinos oligonucléotide antisens très stable qui s ? apparient spéci ?quement à l ? ARNm cible et bloque sa traduction par encombrement stérique résultat sous-expression ou absence de la fonction ?? Inactivation de protéine possible par Injection d ? anticorps spéci ?que qui bloque sa fonction CChapitre Contrôle du développement embryonnaire Identi ?cation des molécules impliquées dans