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Genetique1an16 biologie moleculaire genie genetique

UNIVERSITE D ? ALGER Faculté de Médecine et de Médecine Dentaire ZIANIA Ch? teau Neuf OUTILS DE BIOLOGIE MOLECULAIRE ET GENIE GENETIQUE COURS DE GENETIQUE - - - CIntroduction ? les méthodes de la biologie moléculaire sont essentiellement basées sur l ? hybridation entre les bases purique A et G et pyrimidiques C T et U ? Grace à ces lois de complémentarité il est possible d ? associer un brin d ? acide nucléique avec une sonde et de reconnaitre le gène ou la séquence étudiée ? Les sondes permettent de détecter des séquences uniques de génome ? Il est ensuite possible d ? ampli ?er une séquence de gène présente en un nombre limité d ? exemplaires dans l ? échantillon ? Les enzymes de restriction permettent de couper l ? ADN dans des endroits précis ? l ? électrophorèse permet de séparer les segments ADN obtenus en fonction de leurs poids moléculaires CIntroduction La contribution de la biologie moléculaire est considérable ?? Connaissance de la physiologie moléculaire contenu de la cellule ?? Détermination des séquences des gènes ?? Connaissance sur les mécanismes de régulation de l ? expression des gènes ?? La pathologie moléculaire ?? Diagnostic des maladies héréditaires ?? Elle contribue au conseil génétique CIntroduction ?? Elle possède des applications en médecine légale comme ?? La reconnaissance catastrophes des personnes lors des grandes ?? La reconnaissance de paternité ?? La destruction des individus en criminologie mis en ?uvre l'empreinte génétique permettant d'identi ?er sans erreur un individu à partir d'un échantillon de son ADN Les matériaux qui sont typiquement recherchés sont le sang les poils et plumes la salive les excréments des échantillons de peau ou de mucus ainsi que d ? autres types de tissus La principale méthode utilisée pour analyser ces matériaux est l ? analyse ADN CPlan du cours I-Les Enzymes IV Les Techniques I- Enzymes de restriction I Les exo-nucléases IV- Technique d ? électrophorèse sur gel d ? agarose I Les endo-nucleases I- ADN polymerases I- - Fragment de Klenow IV- Technique PCR IV- Technique de séquençage IV- Southern blot I Taq polymérase I- Les ligases V-Applications II Les vecteurs II- Vecteur de clonage II- Vecteur d'expression V- Diagnostic génétique V- Thérapie génique V- Synthèse de molécules thérapeutiques III Les sondes moléculaires CI - Les Enzymes I - Enzymes de restriction Molécules extraites à partir de microorganismes généralement des bactéries et qui coupent les liaisons phospho-diester au niveau des acides nucléiques I Les exo nucléases Elles digèrent l'ADN à partir de l'extrémité ' ou ' CI - Les Enzymes I - Enzymes de restriction I Les endo nucléases Elles coupent l'ADN à l'intérieur en cassant les liaisons phospho-diester coupent au niveau de sites spéci ?ques appelés sites de restrictions ? ces sites sont de nature palindromique c'est-à-dire que la lecture des deux brins complémentaires dans des sens opposés donne la même séquence ? ATGCTAGATAGCAT ? ? TACGATCAATCGTA ? Séquence palindromique Cendo-nucléases Il y a deux catégories d'endo-nucléases celles qui donnent des