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Chap 2 1 ?? LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - N Juillet-Août Article de synthèse Évolution des techniques de séquençage EL FAHIME Elmostafa and Ennaji Mly Mustapha Unités d ? Appui Technique à la Recherche Scienti ?que UATRS Plateforme Biologie moléculair

?? LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - N Juillet-Août Article de synthèse Évolution des techniques de séquençage EL FAHIME Elmostafa and Ennaji Mly Mustapha Unités d ? Appui Technique à la Recherche Scienti ?que UATRS Plateforme Biologie moléculaire et Génomique Fonctionelle CNRST RABAT elfahime cnrst ma Laboratoire de Virologie Hygiène et Microbiologie FST Mohammadia Université Hassan II - Mohammadia Résumé La biologie analytique a connu depuis quelques années une grande révolution en conséquence des progrès technologiques de la biologie moléculaire appliquée au séquençage des génomes En e ?et conna? tre l ? encha? nement complet des bases nucléotidiques qui constituent un génome c ? est conna? tre toute l ? information nécessaire à la vie du moins en théorie Ce n ? est que récemment avec la mise en place des Programmes Génome que de nombreux génomes dont celui de l ? être humain sont aujourd ? hui séquencés et que d ? autres génomes sont en voie de l ? être dans des délais de plus en plus raccourcis Ces réalisations spectaculaires sont rendues possible gr? ce aux développements extraordinaires des techniques de séquençage que nous essayons de passer en revue dans cet article Nous rappellerons dans un premier temps le principe de base et l ? évolution des techniques traditionnelles Sanger Maxam et pyroséquençage Nous discuterons les avantages et les inconvénients de chaque approche avant d ? exposer la nouvelle génération de séquenceurs automatisés Historique Le séquençage de l ? ADN a été inventé dans la deuxième moitié des années Deux méthodes ont été développées indépendamment l ? une par l ? équipe de Walter Gilbert Maxam and Gilbert aux ÉtatsUnis et l ? autre par celle de Frederick Sanger Sanger Nicklen et al en Grande-Bretagne Ces deux méthodes sont fondées sur des principes diamétralement opposés l ? approche de Sanger est une méthode par synthèse enzymatique sélective tandis que celle de Maxam et Gilbert est une méthode par dégradation chimique sélective Pour cette C LES TECHNOLOGIES DE LABORATOIRE - N Juillet-Août ?? découverte Gilbert et Sanger ont été récompensés par le prix Nobel de chimie en Kolata Par ailleurs la première méthode non Sanger ayant fait ses preuves dans le domaine de séquençage a été introduite en Ronaghi Uhlen et al Hyman et al il s ? agit de pyroséquençage une technique principalement basé sur l ? addition d ? un seul nucléotide qui est révélé en temps réel par détection de la luminescence Le début du siècle est marqué par l ? avènement de la nouvelle génération des techniques de séquençage il s ? agit en faite de méthodologies nouvelles ou adaptées de séquençage découlant des avancées technologiques issues de l ? évolution des connaissances en physique informatique chimique nanotechnologie et en biotechnologie Ces innovations technologiques visent à réduire le coût et le temps nécessaire pour le séquençage génome complet en se basant sur la miniaturisation et le groupage parallèle des réactions dans des volumes très restreint Deux exemples concernant des technologies novatrices ayant fait leurs preuves