Remerciez-le!

Remerciez @Admin pour avoir partagé cet document gratuitement, de la manière la plus simple, en partageant sur les réseaux sociaux.

Chapitre i genie genitique

Chapitre I Les outils enzymatiques du génie génétique II- Les enzymes de restriction Dé ?nition Enzymes bactériennes à l ? origine d ? un mécanisme de défense des bactéries vis-à-vis des virus système de restriction-méthylation Ce sont des endonucléases capables de cliver les liaisons phosphodiester entre les nucléotides à l ? intérieur de séquences nucléotidiques spéci ?ques Mécanisme d ? action Elles catalysent la coupure de l ? ADN non méthylé en des endroits caractérisés par une séquence spéci ?que de nucléotides à pb site de restriction Produits Fragments de restriction dont la longueur toujours la même pour un ADN donné ne dépend que de la séquence primaire de cet ADN Système de restriction est donc un mode de défense des bactéries vis-à-vis des bactériophages incluant des enzymes de restriction pour digérer l ? ADN parasite et des enzymes de méthylation pour protéger l ? ADN bactérien ? Les Bactéries sont lysées sous l ? e ?et de virus bactériophages dont l ? ADN est répliqué par la bactérie elle-même avant sa destruction ? Pour détruire l ? ADN du parasite la Bactérie exprime des gènes de restriction et de méthylation ? Les gènes de restriction permettent la synthèse d ? endonucléases coupant l ? ADN en des sites très spéci ?ques ? A ?n de protéger l ? ADN bactérien de l ? hydrolyse par l ? enzyme une méthylase codée par le gène de méthylation va modi ?er les nucléotides de l ? ADN bactérien en les méthylant pour qu ? ils ne soient plus reconnus par l ? enzyme de restriction ? L ? ensemble du gène de restriction et du gène de méthylation constituent un système de défense de la Bactérie vis-à-vis des phages Applications recherche de variations individuelles par RFLP polymorphismes de longueur des fragments de restriction C ? est une des techniques d ? analyse de la séquence Cprimaire de l ? ADN à la recherche de substitutions d ? insertions ou de délétions qui modi ?ent le nombre de sites de restriction et donc la longueur des fragments de restriction RFLP Les fragments de restriction obtenus à partir d'un bout d'ADN dépendent de l'enzyme utilisée pour les générer ainsi que de la séquence de ce bout d'ADN puisque l'ER a une spéci ?cité de coupure Une mutation pourra en modi ?ant la séquence primaire de l'ADN entra? ner une modi ?cation de sa carte de restriction un site qui dispara? t ou au contraire qui appara? t Il est déraisonnable de chercher à caractériser un génome complet par les fragments de restriction obtenus puisque même pour un génome relativement petit bactérie de l'ordre de bp une ER ayant un site de bp un site toutes les bp donnera de l'ordre de fragments qui par électrophorèse en gel d'agarose ne seront pas séparés et donneront une tra? née Pour être un repère ?able un RFLP doit être identi ?able sans aucune ambigu? té il ne peut donc se trouver que dans une région non