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Les Bacillus Les Bacillus Aspect microscopique Bacilles Gram + présentant une s

Les Bacillus Les Bacillus Aspect microscopique Bacilles Gram + présentant une spore Distinction de trois groupes: Bacillus à spore ovale non déformante, Bacillus à spore ovale déformante, Bacillus à spore ronde déformante À l’EF : mobiles le plus souvent par ciliature péritriche Observation au MEB Forme végétative : bacilles à bouts arrondis Forme de résistance : spore dans un environnement favorable permet le développement d’un nouveau Bacillus. Bacillus anthracis Observation microscopique Grand bacille (5 µm de long, 1 µm de large), Gram +, Formant une spore ovalaire centrale non déformante. immobiles capsulé Il élabore une toxine comprenant trois facteurs agissant en synergie: facteur I  oedématogène facteur II  immunogène facteur III létal Caractères biochimiques: AAF , glucose +, non exigeant, VP + (caractère de la classification des Bacillus), gélatinase +, uréase -, maltose +, saccharose + Les milieux de culture des Bacillus Gélose à l’amidon Gélose nutritive à 1% d’amidon de riz ou de pomme de terre Ensemencer par une strie centrale à partir d’une suspension bactérienne. Ou en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose Incuber 24 heures à 37°C Gélose à l’oeuf Gélose trypticase-soja à 10% de jaune d’œuf stérile Ensemencer par une strie centrale à partir d’une suspension bactérienne. Ou en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose Incuber 24 heures à 37°C Milieu TCA Composition Peptone trypsique de caséine 20 g Chlorure de sodium 5 g Sulfite de sodium 0,5 g Cystine 0,5 g Rouge de phénol 0,017 g Gélose 2,5 g ED qsp 1 L Source N Source de C et N Indicateur de pH pH = 6,8 à 7 Ensemencement Sources minérales Régénérer les milieux 20 min au BM à 100°C. Refroidir les tubes à 45°C. Incorporer le sucre désiré pour une concentration finale de 1% (10g.L-1). Solidifier les milieux sous l’eau froide. Ensemencer par piqûre centrale. Incuber 24 heures à 37°C. Milieu de Mossel Composition Extrait de viande 1 g Peptone 10 g Mannitol 10 g Chlorure de sodium 10 g Rouge de phénol 0,025 g Agar 12 g ED qsp 1 L Source N Indicateur de pH pH = 7,1 Sources minérales Sources de carbone Au moment de l’emploi, ajouter à 90 mL de milieu: 10 mL de jaune d’œuf dilué au ½ dans de l’eau physiologique 1, 2, 5 ou 10 mL de polymyxine à 1 mg/mL (Inhibiteur) Ensemencement Isolement par la technique des quadrants. C’est un milieu d’isolement sélectif des Bacillus de l’espèce Bacillus cereus à partir des aliments ou des selles. Gélose au lait Gélose blanche à 2,5 à 3% d’agar en solution dans l’eau dans laquelle on ajoute la même quantité de lait stérile. Ensemencer en faisant 5 ou 6 dépôts d’öse sur la gélose Incuber 24 heures à 37°C Recouvrir de lugol la gélose après culture Pas de coloration noire autour des cultures: absence d’amidon  il a été hydrolysé par les bactéries, test positif Coloration noire autour des cultures: présence d’amidon  test négatif Gélose à l’amidon Lecture des milieux Gélose à l’œuf Lecture directe: Éclaircissement du milieu de culture  les bactéries ont hydrolysé les lécithines du jaune d’œuf , test positif Pas de changement du milieu  test négatif Gélose Mossel Colonies rouges entourées d’un halo opaque et blanchâtre  suspicion de Bacillus cereus, LECITHINASE +++ Présence d’un halo: hydrolyse des lécithines par une lécithinase, en choline soluble et diglycéride insoluble qui précipite dans le milieu en formant un trouble. Colonies rouges  pas d’utilisation de mannitol par les bactéries  MANNITOL - Lecture directe après culture Halo clair autour de la culture  hydrolyse de la caséine, test positif Pas de modification du milieu autour de la culture  test négatif, la caséine n’est pas hydrolysée. Gélose au lait Correction du TP 1er jour N° impair: Bacilles en chaînette Gram + N° pair: Bacilles en chaînette Gram + présence d’une spore déformante dans le bacille. 2nd jour N° pair: présence d’une spore centrale ovoïde déformante Coloration des spores au vert de Malachite Lecture du VF N° impair: culture en surface  AS N° pair: culture dans tout le tube  AAF 1ère orientation: bacilles Gram +, mobiles, catalase +, VP+, non exigeants,(sporogène), AS  orientation vers le genre Bacillus. 1ère orientation: Bacilles Gram +, mobiles, VP+, non exigeants, sporogènes, AAF  orientation vers le genre Bacillus. Lecture des milieux CTA N° impair gluco se Virage de l’indicateur de pH  glucose + xylos e Virage de l’indicateur de pH  xylose + arabino se Virage de l’indicateur de pH  arabinose + N° pair gluco se Virage de l’indicateur de pH  glucose + xylos e Pas de virage de l’indicateur de pH  xylose - arabino se Pas de virage de l’indicateur de pH  arabinose - Lecture de la gélose à l’amidon (n°pair et impair) Pas de coloration autour de la culture  absence d’amidon qui a été hydrolysée par l’-amylase des Bacillus. Lecture de la gélose au lait (n°pair et impair) Présence d’un halo d’éclaircissement autour de la culture  de la caséine a été hydrolysée par les protéases des Bacillus. Lecture de la gélose à l’œuf Présence d’un halo clair autour de la culture  les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus. n° pair n° impair Pas de modification autour de la culture  les lécithines n’ont pas été hydrolysées. Lecture de la gélose de Mossel n° pair Colonie rose  pas d’utilisation du mannitol par les Bacillus  MANNITOL - Présence d’un halo clair autour de la culture  les protéines du jaune d’oeuf ont été hydrolysées par les protéases des Bacillus. Présence d’un halo opaque autour de la culture  les lécithines ont été hydrolysées par la lécithinase des Bacillus. Suspicion de Bacillus cereus Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (-amylase, lécithinase, protéases), glc +, xylose-, arabinose -, culture caractéristique sur Mossel  Bacillus cereus. Lecture de la gélose de Mossel n° impair Colonie jaune  Utilisation du mannitol par les Bacillus  MANNITOL + Absence d’un halo opaque autour de la culture  les lécithines n’ont pas été hydrolysées par les Bacillus. Il s’agit d’un Bacillus autre que Bacillus cereus Identification de l’espèce: Bacillus présentant divers enzymes (-amylase, protéases), glc +, xylose+, arabinose + Bacillus subtilis (tableau p 132 du livre). uploads/s3/ les-bacillus 1 .pdf