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bioMérieux SA Français - 1 20 050 07615K - fr - 2009/11 ® 20 NE Système d'ident

bioMérieux SA Français - 1 20 050 07615K - fr - 2009/11 ® 20 NE Système d'identification des bacilles à Gram négatif non entérobactéries et non fastidieux INTRODUCTION ET OBJET DU TEST API 20 NE est un système standardisé pour l’identification des bacilles à Gram négatif non enterobactéries et non fastidieux (ex. Pseudomonas, Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, etc.) combinant 8 tests conventionnels, 12 tests d'assimilation, et une base de données. La liste complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec ce système est présente dans le Tableau d'Identification en fin de notice. PRINCIPE La galerie API 20 NE comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les tests conventionnels sont inoculés avec une suspension bactérienne saline qui reconstitue les milieux. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. Les tests d'assimilation sont inoculés avec un milieu minimum et les bactéries cultivent seulement si elles sont capables d'utiliser le substrat correspondant. La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de Lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification. PRESENTATION (coffret de 25 tests) - 25 galeries API 20 NE - 25 boîtes d'incubation - 25 ampoules d’API AUX Medium - 25 fiches de résultats - 1 notice COMPOSITION Galerie La composition de la galerie API 20 NE est reportée dans le tableau de lecture de cette notice. Milieu API AUX Medium 7 ml Sulfate d'ammonium 2 g Agar 1,5 g Solution de vitamines 10,5 ml Solution d’oligo-éléments 10 ml Phosphate monosodique 6,24 g Chlorure de potassium 1,5 g Eau déminéralisée qsp 1000 ml pH final : 7,0-7,2 REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactifs - API NaCl 0,85 % Medium, 2 ml (Réf. 20 070) - Réactifs : JAMES (Réf. 70 542) NIT 1 + NIT 2 (Réf. 70 442) Zn (Réf. 70 380) - Oxydase (Réf. 55 635*) * référence non commercialisée dans certains pays : utiliser un réactif équivalent. - Huile de paraffine (Réf. 70 100) - McFarland Standard (Réf. 70 900) point 0,5 - Catalogue Analytique API 20 NE (Réf. 20 090) ou logiciel d'identification apiweb TM (Réf. 40 011) (consulter bioMérieux) Matériel - Pipettes ou PSIpettes - Protège-ampoule - Portoir pour ampoules - Equipement général de laboratoire de bactériologie PRECAUTIONS D'UTILISATION xPour diagnostic in vitro et pour contrôle micro- biologique. xPour usage professionnel uniquement. xCe coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler). xLes prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme poten- tiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections ; Approved Guideline - Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Micro- biological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Dernière édition", ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. xNe pas utiliser les réactifs après la date de péremption. xAvant utilisation, s’assurer de l’intégrité de l’emballage et des composants. xNe pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy- sique : cupule déformée, … xOuvrir les ampoules délicatement comme suit : - Placer l'ampoule dans le protège-ampoule. - Tenir l'ensemble verticalement dans une main (bouchon blanc vers le haut). - Bien enfoncer le bouchon. - Exercer une pression horizontale avec le pouce sur la partie striée du bouchon de façon à casser l'extrémité de l'ampoule. - Retirer l'ampoule du protège-ampoule et conserver le protège-ampoule pour une utilisation ultérieure. - Enlever délicatement le bouchon. xLes performances présentées sont obtenues avec la méthodologie indiquée dans cette notice. Toute déviation de méthodologie peut altérer les résultats. xL'interprétation des résultats du test doit être faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine du prélèvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats d'autres tests, en particulier de l'antibiogramme. IVD api® 20 NE 07615K - fr - 2009/11 bioMérieux SA Français - 2 CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries et milieux se conservent à 2-8°C jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur l'emballage. ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API 20 NE ne doit pas être utilisé directement à partir des prélèvements cliniques ou autres. Les microorganismes à identifier doivent dans un premier temps être isolés sur un milieu de culture adapté (ex. gélose Trypcase Soja) selon les techniques usuelles de bactériologie. MODE OPERATOIRE Test Oxydase Le test oxydase doit être réalisé selon les instructions du fabricant, il constitue le 21ème test d’identification à noter sur la fiche de résultats. Sélection des colonies API 20 NE doit être utilisé avec des bacilles à Gram négatif non entérobactéries et non fastidieux. NOTE 1 : certaines espèces de bacilles à Gram négatif non entérobactéries qui sont oxydase négative (S. maltophilia, Acinetobacter...) sont parfaitement identifiées avec API 20 NE. On s'aidera du contexte clinique ou bactériologique pour utiliser cette galerie. NOTE 2 : Les microorganismes fastidieux, exigeants et nécessitant des précautions de manipulation particulières (ex. Brucella et Francisella) ne font pas partie de la base de données API 20 NE. Il convient d'utiliser d'autres techniques pour exclure ou confirmer leur présence. Préparation de la galerie xRéunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer des gaz (Ex : Cl2, CO2 ...)] dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide. xInscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte. (Ne pas inscrire la référence sur le couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la manipulation). xSortir la galerie de son emballage individuel. xPlacer la galerie dans la boîte d'incubation. Préparation de l'inoculum xOuvrir une ampoule d'API NaCl 0,85 % Medium (2 ml) comme indiqué au paragraphe "Précautions d'utilisation" de la notice du produit ou utiliser un tube contenant 2 ml de solution saline à 0.85 %, sans additif. xA l'aide d'une pipette ou d'une PSIpette, prélever 1 à 4 colonies de morphologie identique, par aspirations ou par touches successives. Utiliser préférentiel- lement des cultures jeunes (18-24 heures). xRéaliser une suspension d'opacité égale à 0,5 de McFarland. Cette suspension doit être utilisée extemporanément. NOTE : Pour le bon fonctionnement des tests de la galerie API 20 NE, il est très important d'ajuster la densité de l'inoculum au point 0,5 de McFarland. En particulier, une turbidité plus faible conduit à des résultats faussement négatifs. Ne pas toucher les cupules lors des manipulations et veiller à ne pas laisser la galerie exposée à l'air longtemps après inoculation. Inoculation de la galerie xRemplir les tubes (et non les cupules) des tests NO3 à PNPG avec la suspension précédente en utilisant la pipette ayant servi au prélèvement. Pour éviter la formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe de la pipette ou de la PSIpette sur le côté de la cupule, en inclinant légèrement la boîte d'incubation vers l'avant. xOuvrir une ampoule d’API AUX Medium comme indiqué au paragraphe "Précautions d’utilisation" et y transférer environ 200 µl de la suspension précédente. Homogénéiser avec la pipette en évitant la formation de bulles. xRemplir tubes et cupules des tests GLU à PAC en veillant à créer un niveau horizontal ou légèrement convexe, mais jamais concave. Des cupules incomplètement remplies ou trop remplies peuvent entraîner des résultats incorrects. xRemplir d'huile de paraffine les cupules des trois tests soulignés (GLU, ADH, URE) pour former un ménisque convexe. xRefermer la boîte d'incubation et incuber à 29°C ± 2°C pendant 24 heures (± 2 heures). LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie xAprès incubation, la lecture de la galerie doit se faire en se référant au Tableau de Lecture. xNoter sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées (GLU, ADH, URE, ESC, GEL, PNPG). xLa révélation des deux tests NO3 et TRP doit se faire en mettant les tests d'assimilation à l'abri d'une contamination par l'air ; pour cela, placer le couvercle de la boîte d'incubation au dessus de ces tests, pendant la période de révélation des tests NO3 et TRP. xTest NO3 : - Ajouter une goutte de réactifs NIT 1 et NIT 2 dans la cupule NO3. - Après 5 mn, une couleur rouge indique une réaction positive, à noter sur la fiche de résultats. - Une réaction négative peut être due à la production d'azote (éventuellement signalée par la présence de microbulles) ; ajouter 2-3 mg de réactif Zn dans la cupule NO3. - Après 5 mn, une cupule restée incolore indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. Si la cupule devient rose-rouge, la réaction est négative car les nitrates encore présents dans le uploads/Finance/ api-20ne.pdf