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bioMérieux® SA Français - 1 REF 20 100 / 20 160 07584E - FR - 2004/05 ® 20 E Sy

bioMérieux® SA Français - 1 REF 20 100 / 20 160 07584E - FR - 2004/05 ® 20 E Système d'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux INTRODUCTION ET OBJET DU TEST API 20 E est un système standardisé pour l'identification des Enterobacteriaceae et autres bacilles à Gram négatif non fastidieux, comprenant 21 tests biochimiques miniaturisés, ainsi qu'une base de données. La liste complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec ce système est présente dans le Tableau d'Identification en fin de notice. PRINCIPE La galerie API 20 E comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de Lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification. PRESENTATION Coffret de 25 tests (réf. 20 100) - 25 galeries API 20 E - 25 boîtes d'incubation - 25 fiches de résultats - 1 barrette de fermeture - 1 notice Coffret de 100 tests (réf. 20 160) - 100 galeries API 20 E (4x25 galeries) - 100 boîtes d'incubation - 100 fiches de résultats - 1 barrette de fermeture - 1 notice COMPOSITION DE LA GALERIE La composition de la galerie API 20 E est reportée dans le Tableau de Lecture de cette notice. REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactifs : - API NaCl 0,85 % Medium, 5 ml (Réf. 20 230) ou API Suspension Medium, 5 ml (Réf. 20 150) - API 20 E coffret de réactifs (Réf. 20 120) ou réactifs individuels : TDA (Réf. 70 402) JAMES (Réf. 70 542) VP 1 + VP 2 (Réf. 70 422) NIT 1 + NIT 2 (Réf. 70 442) - Réactif Zn (Réf. 70 380) - Oxydase (Réf. 55 635*) * référence non commercialisée dans certains pays : utiliser un réactif équivalent. - Huile de paraffine (Réf. 70 100) - Catalogue Analytique API 20 E (Réf. 20 190) ou logiciel d'identification (consulter bioMérieux) Matériel : - Pipettes ou PSIpettes - Protège-ampoules - Portoir pour ampoules - Equipement général de laboratoire de bactériologie REACTIFS COMPLEMENTAIRES : - API OF Medium (Réf. 50 110) : Test pour la détermination du métabolisme fermentatif ou oxydatif du glucose. - API M Medium (Réf. 50 120) : Test pour la détermination de la mobilité des bactéries aéro-anaérobies. PRECAUTIONS D'UTILISATION • Pour diagnostic in vitro et pour contrôle micro- biologique. • Pour usage professionnel uniquement. • Ce coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler). • Les prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme poten- tiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline - Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Dernière édition", ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. • Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption. • Avant utilisation, s'assurer de l'intégrité de l'emballage des différents composants. • Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy- sique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, … • Les performances présentées sont obtenues avec la méthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé- viation de méthodologie peut altérer les résultats. • L'interprétation des résultats du test doit être faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine du prélèvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats d'autres tests, en particulier de l'antibiogramme. IVD api® 20 E 07584E - FR - 2004/05 bioMérieux® SA Français - 2 CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries sont présentes dans une poche en aluminium avec sachets déshydratants. Après ouverture de celle-ci (*), conserver les galeries restantes avec les déshydratants en refermant la poche à l'aide de la barrette de fermeture (présente dans le coffret) : placer l'extrémité de la poche entre les deux pièces de la barrette et les clamper soigneusement, à fond, sur toute leur longueur. Les galeries peuvent ainsi être conservées 10 mois après ouverture de la poche, à 2-8°C (ou jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur l'emballage, si celle-ci est antérieure). (*) Recommandation pour l'ouverture de celle-ci : couper juste en dessous de la soudure, en maintenant la poche droite, pour éviter d'endommager les sachets déshydra- tants. ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API 20 E ne doit pas être utilisé directement à partir des prélèvements d'origine clinique ou autres. Les microorganismes à identifier doivent dans un premier temps être isolés sur un milieu de culture adapté à la culture des Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non fastidieux selon les techniques usuelles de bactériologie. MODE OPERATOIRE Test oxydase Le test oxydase doit être réalisé selon les instructions du fabricant, il constitue le 21ème test d’identification à noter sur la fiche de résultats. Préparation de la galerie • Réunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer des gaz (Ex : Cl2, CO2 ...)] dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide. • Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de la boîte. (Ne pas inscrire la référence sur le couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la manipulation). • Sortir la galerie de son emballage. • Placer la galerie dans la boîte d'incubation. NOTE : API 20 E doit être utilisé avec des Enterobacteriaceae et/ou des bacilles à Gram négatif non fastidieux. Les microorganismes fastidieux, exigeants et nécessitant des précautions de manipulation particulières (ex. Brucella et Francisella) ne font pas partie de la base de données API 20 E. Il convient d'utiliser d'autres techniques pour exclure ou confirmer leur présence. Préparation de l'inoculum • Ouvrir une ampoule d'API NaCl 0,85 % Medium (5 ml) ou une ampoule d'API Suspension Medium (5 ml) comme indiqué au paragraphe "Précautions" de la notice du produit, ou utiliser un tube contenant 5 ml d'eau physiologique stérile ou d'eau distillée stérile, sans additif. • A l'aide d'une pipette ou d'une PSIpette, prélever une seule colonie bien isolée sur milieu gélosé. Utiliser préférentiellement des cultures jeunes (18-24 heures). • Réaliser une suspension bactérienne en homo- généisant soigneusement les bactéries dans le milieu. Cette suspension doit être utilisée extemporanément. NOTE : la plupart des espèces de Vibrio sont halophiles. En cas de suspicion d'un Vibrio, réaliser la suspension bactérienne dans API NaCl 0,85 % Medium. Inoculation de la galerie • Remplir tubes et cupules des tests CIT , VP et GEL avec la suspension bactérienne en utilisant la pipette ayant servi au prélèvement. • Remplir uniquement les tubes (et non les cupules) des autres tests. • Créer une anaérobiose dans les tests ADH, LDC, ODC, H2S, URE en remplissant leur cupule d'huile de paraffine. • Refermer la boîte d'incubation. • Incuber à 36°C ± 2°C pendant 18-24 heures. LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie • Après incubation, la lecture de la galerie doit se faire en se référant au Tableau de Lecture. • Si 3 tests ou plus (test GLU + ou –) sont positifs, noter sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées puis révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs : - Test TDA : ajouter 1 goutte de réactif TDA. Une couleur marron-rougeâtre indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. - Test IND : ajouter 1 goutte de réactif JAMES. Une couleur rose diffusant dans toute la cupule indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. - Test VP : ajouter 1 goutte des réactifs VP 1 et VP 2. Attendre au minimum 10 minutes. Une couleur rose ou rouge indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. Une faible coloration rose apparaissant après 10 minutes doit être considérée négative. NOTE : Le test de la recherche de production d’indole doit être réalisé en dernier, car cette réaction libère des gaz qui risquent d’altérer l’interprétation d’autres tests de la galerie. Ne pas remettre le couvercle d’incubation après l’ajout du réactif. • Si le nombre de tests positifs avant ajout des réactifs (y compris le test GLU) est inférieur à 3 : - Réincuber la galerie 24 heures (± 2 heures) de plus sans rajouter les réactifs. - Révéler les tests nécessitant l'addition de réactifs (voir paragraphe précédent). - Pour compléter l'identification, il peut être uploads/Finance/ api20e.pdf