Remerciez-le!

Remerciez @Admin pour avoir partagé cet document gratuitement, de la manière la plus simple, en partageant sur les réseaux sociaux.

bioMérieux® SA Français - 1 20 300 07882G - FR - 2006/02 ® 20 A Système d'ident

bioMérieux® SA Français - 1 20 300 07882G - FR - 2006/02 ® 20 A Système d'identification des bactéries anaérobies INTRODUCTION ET OBJET DU TEST Le système API 20 A permet de rechercher rapidement et facilement 21 caractères pour l'identification biochimique des bactéries anaérobies. D'autres caractères tels que croissance en gélose profonde, aspect des colonies, morphologie cellulaire, coloration de Gram ... sont à rechercher et à intégrer dans la méthodologie utilisée pour pouvoir réaliser une identification complète. La liste complète des bactéries qu'il est possible d'identifier avec ce système est présente dans le Tableau d'Identification en fin de notice. PRINCIPE La galerie API 20 A comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne qui reconstitue les tests. Les réactions produites pendant la période d'incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l'addition de réactifs. La lecture de ces réactions se fait à l'aide du Tableau de Lecture et l'identification est obtenue à l'aide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel d'identification. PRESENTATION (coffret de 25 tests) - 25 galeries API 20 A - 25 boîtes d'incubation - 25 ampoules d’API 20 A Medium - 25 fiches de résultats - 1 notice COMPOSITION Galerie La composition de la galerie API 20 A est reportée dans le tableau de lecture de cette notice. Milieu API 20 A Medium 4 ml Trypticase 5 g Extrait de levure 5 g Chlorure de sodium 2,5 g L-tryptophane 0,2 g L-cystine 0,4 g Hémine (origine porcine) 0,005 g Vitamine K1 0,01 g Sulfite de sodium 0,1 g Eau démineralisée qsp 1000 ml pH 6,9-7,3 REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactifs / Instrumentation - Huile de paraffine (Réf. 70 100) - Réactifs : BCP (Réf. 70 510) EHR (Réf. 70 520) XYL (Réf. 70 530) - McFarland Standard (Réf. 70 900) - Catalogue Analytique API 20 A (Réf. 20 390), logiciel d'identification apiweb TM (Réf. 40 011), automate ATB TM ou mini API (consulter bioMérieux) - Eau oxygénée sol. à 3 % Matériel - Ecouvillons - Pipettes ou PSIpettes - Système d’anaérobiose - Portoir pour ampoules - Protège-ampoule - Equipement général de laboratoire de bactériologie dont lampe UV (365 nm) PRECAUTIONS D'UTILISATION xPour diagnostic in vitro et pour contrôle micro- biologique. xPour usage professionnel uniquement. xCe coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer; ne pas inhaler). xLes prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme poten- tiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids, and Tissue; Approved Guideline - Révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Dernière édition", ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. xNe pas utiliser les réactifs après la date de péremption. xAvant utilisation, s’assurer de l’intégrité de l’emballage et des composants. xNe pas utiliser de galeries ayant subi une altération phy- sique : cupule déformée, ... xOuvrir les ampoules délicatement comme suit : - Placer l'ampoule dans le protège-ampoule. - Tenir l'ensemble verticalement dans une main (bouchon blanc vers le haut). - Bien enfoncer le bouchon. * Modèle 1 : - Recouvrir la partie inclinée du bouchon avec la première phalange du pouce. - Exercer une pression avec le pouce à la base de la partie inclinée du bouchon de façon à casser l'extrémité de l'ampoule. * Modèle 2 : - Exercer une pression horizontale avec le pouce sur la partie striée du bouchon de façon à casser l'extrémité de l'ampoule. - Retirer l'ampoule du protège-ampoule et conserver le protège-ampoule pour une utilisation ultérieure. - Enlever délicatement le bouchon. IVD api® 20 A 07882G - FR - 2006/02 bioMérieux® SA Français - 2 xLes performances présentées sont obtenues avec la méthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé- viation de méthodologie peut altérer les résultats. xL'interprétation des résultats du test doit être faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de l'origine du prélèvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats d'autres tests, en particulier de l'antibiogramme. CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries et milieux se conservent à 2-8°C jusqu'à la date limite d'utilisation indiquée sur l'emballage. ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API 20 A ne doit pas être utilisé directement à partir des prélèvements d'origine clinique ou autre. Les microorganismes à identifier doivent dans un premier temps être isolés sur un milieu de culture adapté selon les techniques usuelles de bactériologie. MODE OPERATOIRE Préparation de l'inoculum xOuvrir l'ampoule d’API 20 A Medium comme indiqué au paragraphe "Précautions d’utilisation". xA l'aide d'un écouvillon, prélever toutes les colonies obtenues sur gélose au sang en anaérobiose. Utiliser préférentiellement des cultures jeunes (18-24 heures). Bien vérifier la pureté de la souche (éventuellement, réaliser une subculture à partir d'une colonie bien isolée). xTenir l'ampoule verticalement et émulsifier les germes en frottant l'écouvillon par rotations contre la paroi de l'ampoule tout en restant dans le milieu de suspension. L'opacité finale doit être supérieure ou égale à celle de l'étalon 3 de McFarland. Cette suspension doit être utilisée extemporanément. Les bactéries à croissance lente peuvent nécessiter plusieurs boîtes de subculture pour obtenir l'inoculum de la densité requise. NOTE : Pour maintenir une certaine anaérobiose, il convient d'éviter l'introduction d'air lors de l'homo- généisation du milieu. Préparation de la galerie xRéunir fond et couvercle d'une boîte d'incubation et répartir environ 5 ml d'eau distillée ou déminéralisée [ou toute eau sans additif ou dérivés susceptibles de libérer des gaz (Ex : Cl2, CO2 ...)] dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide. xInscrire les références des souches sur la languette latérale de la boîte. (Ne pas inscrire les références sur le couvercle, celui-ci pouvant être déplacé lors de la manipulation.) xSortir une galerie API 20 A de son emballage et la déposer dans la boîte d'incubation. xA l'aide d'une pipette stérile, inoculer la galerie avec API 20 A Medium ensemencé, en évitant la formation de bulles et en inclinant légèrement la galerie. - Pour le test GEL , remplir tube et cupule. - Pour le test IND, remplir seulement le tube avec API 20 A Medium et remplir la cupule avec de l'huile de paraffine, pour éviter l'évaporation de l'indole formé. xRefermer la boîte d'incubation et incuber 24 heures (± 2 heures) à 36°C ± 2°C, en chambre anaérobie, en jarre ou en sachet individuel. xLe surplus d’API 20 A Medium peut servir à vérifier la pureté et la viabilité de la souche, en inoculant une gélose profonde ou un jeu de 2 boîtes de milieu de culture, incubées l'une en aérobiose, l'autre en anaérobiose. LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la galerie Beaucoup de bactéries anaérobies donnent en 24 heures une réponse claire et facile à interpréter, mais certaines souches ont une croissance lente et ne sont identifiables qu'après 48 heures d'incubation. xAprès incubation, la lecture de la galerie doit se faire en se référant au Tableau de Lecture. xNoter sur la fiche de résultats toutes les réactions spontanées (ne nécessitant pas l'addition de réactifs). xRévéler les tests nécessitant l'addition de réactifs : - Le BCP du milieu réactionnel peut être décoloré par réduction. Dans ce cas, révéler la réaction d'acidification en ajoutant 1 goutte de réactif BCP dans tous les microtubes contenant des carbo- hydrates. Une couleur jaune ou vert-jaune indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. - Test IND : ajouter 1 goutte de réactif XYL. Mélanger et attendre 2-3 minutes. Ajouter 1 goutte de réactif EHR. Le réactif doit rester à la surface du mélange xylène/huile de paraffine au niveau de la cupule (afin de ne pas diluer la coloration dans le microtube). Lire dans les 5 minutes qui suivent. Une couleur rouge indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. - Test CAT : La production de catalase est mise en évidence après 30 minutes d'exposition des galeries à l'air libre. Ajouter 2 gouttes de H2O2 à 3 % dans un tube positif. L'apparition de bulles indique une réaction positive à noter sur la fiche de résultats. Interprétation L'identification est obtenue à partir du profil numérique. xDétermination du profil numérique : La fiche de résultats reproduit le dessin de la galerie API 20 A avec ses 20 tests, plus la réaction de la catalase et 3 tests de morphologie : SPOR pour spore (+, –), GRAM (+, –) et COCC pour coccus (+, –). Sur la fiche de résultats, les tests sont séparés par groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. uploads/Finance/ introduction-et-objet-du-test-materiel.pdf