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Définition :Une substance naturelle est une substance présente telle quelle dan

Définition :Une substance naturelle est une substance présente telle quelle dans la nature et non traitée, ou alors traitée uniquement et directement par des moyens physiques(mécanique) ou indirectement avec de l’eau (dissolution, flottation, extraction, distillation à la vapeur ou par chauffage pour éliminer l’eau) Chapitre 1 : Substances naturelles d’origine marine (animaux, algues et microorganismes) 1-Les mollusques marins : Ils forment un embranchement du règne animal appelé les métazoaires. Leurs corps est mou, non segmenté et généralement pourvu d’une coquille calcaire. a- Les peptides antimicrobiens :Peu sont connus, ils sont les composés majeurs du système de leur défense. Les premiers ont été caractérisé chez les moules mytilus edulis (defensine A et B, des mytilines, des myticines et des mytimycine) et M.galloprovincialis (défensines 1 et 2). Ils interviennent dans la destruction des bactéries à l’intérieur des phagocytes. b- Les terpénoides :On connait de cette famille les diterpénes Labdanes. On les trouve chez les gastéropodes. c- Les alcaloïdes : Leur domaine, longtemps limité au règne végétal, s’est élargi aux animaux terrestres ou marins et à divers microorganismes. Le pulo’upone est un alcaloïde isolé d’une mollusque hawaïan(Philinopsis speciosa). 2-Les algues marines : Les algues occupent une place importante dans le milieu marin avec plus de 1200 espèces. Les algues marines constituent un énorme réservoir des molécules naturelles potentiellement actives. a- Les polyphénols : La plupart contiennent des polyphénols algaux (phlorotannins) b- Les terpénoides : On les retrouve surtout chez les algues brunes et vertes c- Les alcaloïdes : ils sont rares d- Les carraghénanes : ils sont des polysaccharides et possèdent des propriétés antivirales 3-Les substances antimicrobiennes d’origine microbienne : classes exemple Les monoterpènes L’huile essentiel extrait du champignon « Ceratocystis virexens » Les sesquiterpènes Les albaflavenone des streptomyces (odeur jasmin) Les diterpènes Periconicine (antibactérienne) : Periconia sp Les triterpènes L’acide helvolique: la levure Pichia guilliermondii Les stéroïdes Penicisteroide (antifongique) :Penicillium chrysogenum Les alcaloïdes Cryptocine (antifongique):Cryptosporiopsis quexina Les composés phénoliques Altenucine (antifongique):Alternaria sp Les autres classes : 1-Les polycétides : C’est une classe des substances naturelles extrêmement important du point de vue commercial ex: *Erythromycine (antibiotique):Streptomyces erythreus *Rifamycine (tuberculose):Amylco latopsis *Tetracycline (antibiotique): Streptomyces sp *Amphotericine B (antifongique): Streptomyces nodosus 2-les peptides : On trouve des antibiotiques commercialisés. Ils ont une activité importante, une résistance non acquise, une toxicité sur les tissus rénal, une utilisation restreinte. Ex: Polymyxine (antibiotique):Bacillus polymyxa Bacitracine (antibiotique): B.subtilis *Les bactériocines :Ils sont pas des antibiotiques mais elles possèdent leurs propriétés. C’est des substances antagonistes. Ceux produites par les bactéries lactiques sont tous dirigés contre les bactéries Gram (+) Chapitre 2 : Les techniques d’étude du pouvoir antimicrobien 1-Les techniques d’extractions : L’extraction est utilisée pour extraire sélectivement un ou plusieurs composés d’un mélange initial. a- L’extraction par solvant : Elle consiste à faire passer, par solubilisation, la substance à extraire dans un solvant. Celui-ci peut être de l’eau ou d’un solvant organique: éthanol, cyclohexane, éther de pétrole, toluène  Extraction directe : L’espèce chimique est extraite d’un produit naturel par macération puis filtration  Extraction liquide-liquide : C’est une opération fondamentale de transfert de matière entre deux phases liquides non miscibles  Extraction solide-liquide: un phénomène lent qui permet d’extraire une substance présente dans un solide pour la faire passer dans un solvant liquide. b- L’hydro-distillation : Elle consiste à distiller un composé par entraînement à la vapeur d’eau. C’est une méthode très utilisée pour l’extraction des huiles essentielles (La vapeur d’eau produite va entraîner avec elle un composé donné). 2- Technique de purification : centrifugation et filtration 3- Conservation : Evaporation sous vide, congélation. TD1 : Obtention des extraits d’une plante à usage antimicrobienne 1-Le choix des plantes : *Une enquête ethnothérapeutique *Collection des plantes d’après leurs usages antimicrobienne *Identification des plantes auprès des botanistes *Recherche bibliographique *Le choix des plantes 2-La récolte des plantes : *Echantillonnage *Séchage à l’obscurité et l’aire libre *Broyage et conservation de la poudre 3-Extraction : *Le choix de la technique utilisée : Macération à froid, ultrasonification, extraction à chaud (extraction solide-liquide) *La pesée de la matière végétale et la réalisation de l’extraction 4-La purification : *Le choix d’après le protocole expérimental : filtration, centrifugation *Extraction liquide-liquide pour l’épuisement des molécules d’après la polarité vis-à-vis des solvants organiques. *Evaporation à sec 5-Conservation : La conservation dans un congélateur pour les tests ultérieurs TD2 : Obtention de l’huile essentielle 1-Le choix de la plante : le même 2-La récolte des plantes : le même 3-Extraction : *Extraction solide-liquide (hydrodistillation) 4-Purification : Evaporation sous vide 5-Conservation de l’huile dans un congélateur TD3 : Activité antimicrobienne 1-Méthode de diffusion sur disque : Le contacte se fait par l’intermédiaire du disque de papier sur lequel on dispose une quantité donnée des extraits de plante. Elle est utilisée surtout pour l’évaluation de l’activité antibactérienne. Le principe c’est le même que l’antibiogramme (préparation de l’inoculum, les dilutions et l’inoculation des bactéries cibles). La différence c’est l’utilisation des disques de papier imprégnée d’extrait au lieu d’antibiotique  Préparation de l’extrait : L’extrait brut est solubilisé par DMSO (préparation de différentes concentrations de l’extrait ou les huiles essentiels).  Préparations des disques de papier et leurs stérilisations  Dépôt de l’extrait : le dépôt de 5 µl par disque  Incubation à 37°c pendant 24h  Mesure de la zone d’inhibition On utilise un control + (antibiotique) et un control – (DMSO) 2-Méthode de contact direct : a- Sur milieu solide : cette méthode est utilisée surtout pour l’évaluation de l’activité antifongique. Les étapes sont les suivantes : *Culture des champignons cible sur PDA en boites de pétri *Incubation 7 jours à 25°c *Solubilisation de l’extrait dans DMSO ou l’huile essentiel dans Tween 80 et préparation des différentes concentrations *Solubilisation des extraits ou les huiles essentiels dans le milieu PDA en surfusion ensuite on coule sur boites de pétri *Le dépôt d’un disque de champignon cible sur le milieu (au centre de la boite) *Incubation pendant 7 jours à 25°c * Mesure du diamètre des colonies * Le control + (un antifongique), le control (–) (sans extrait) *Calcul de l’indice antifongique ou pourcentage d’inhibition ( I=((Db-Da) /Db)x100 Dont Db : diamètre de la colonie du control (–) Da : diamètre de la colonie de l’essai 3-Méthode de microatmosphère : Cette méthode est utilisée surtout pour l’évaluation de l’activité antibactérienne des huiles essentielles. L’ensemencement se fait comme celui de la méthode sur disque. La différence c’est mettre les disques de papier imbibés d’extrait sur le couvercle au lieu du gélose. Le témoin c’est un disque vide sans extrait uploads/Finance/ resume-cours.pdf