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Dif : Laboratoire est un Lieu d'exercice de chercheurs où sont réalisées des ob

Dif : Laboratoire est un Lieu d'exercice de chercheurs où sont réalisées des observations ou des expériences, ainsi que toute autre activité scientifique. Il peut s'agir de prélèvement de sang, de peaux, d'urines, de selles ou de muqueuses. La microbiologie est une branche spécialisée de la biologie, la science qui étudie les organismes microscopiques, les micro-organismes, donc des êtres vivants qui ne peuvent être reconnus à l'oeil nu souvent pour déterminer un germe ou une bactérie, un virus, etc. La microbiologie s'intéresse aux cellules, unicellulaires (cellule unique), multicellulaires (colonie de cellules), ou acellulaires (dépourvue de cellule). Cette science englobe de nombreuses sous-disciplines, y compris la virologie, mycologie, parasitologie et bactériologie. ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ Le Laboratoire de Microbiologie étudie les processus régissant l’organisation, l’évolution des bactéries et des bactériophages, Les bactéries et les phages que nous étudions sont des organismes modèles intéressants aussi bien pour la recherche fondamentale que pour les applications dans les domaines des biotechnologies, de l’industrie alimentaire et de la santé. La microbiologie s'intéresse à l'étude des microorganismes, qu'il s'agisse des bactéries, des champignons, des protozoaires ou des virus. Une connaissance approfondie de leur physiologie, de leur génétique et des interactions entre eux facilite notre compréhension du monde vivant à l'échelle microscopique Défèrent type des labo GROUPE 1 (P1) : « … n’est pas susceptible de provoquer une maladie chez l’homme »  Place de travail tenue propre et en ordre.  Ports de gants uniquement dans les laboratoires.  Lavage des mains avant et après manipulation. GROUPE 2 (P2): « …peut provoquer une maladie chez l'homme et constituer un danger pour les travailleurs; sa propagation dans la collectivité est improbable; il existe généralement une prophylaxie ou un traitement efficace » *Porte et fenêtres fermées pendant la manipulation  Port de blouse uniquement dans les zones confinées  Éviter les plus possible la création d’aérosols, centrifugeuses fermées  Désinfection régulière, et en fin d’activité, des plans de travail avec alcool 70%, désinfectant, etc…  Liste des personnes autorisées sur la porte, supervisées par le responsable de projet GROUPE 3 (P3) : « …peut provoquer une maladie grave chez l'homme et constituer un danger sérieux pour les travailleurs; il peut présenter un risque de propagation dans la collectivité, mais il existe généralement une prophylaxie ou un traitement efficace »  Toutes les surfaces doivent être lisses et faciles à nettoyer  Aucun raccordement avec l’extérieur  Tout matériel contaminé doit être autoclavé dans le laboratoire avant de sortir  Uniquement des vêtements destinés au P3 sont portés et ne sortiront pas du laboratoire sans être préalablement autoclavés GROUPE 4 (P4) : « …provoque des maladies graves chez l'homme et constitue un danger sérieux pour les travailleurs; il peut présenter un risque élevé de propagation dans la collectivité; il n'existe généralement pas de prophylaxie ni de traitement efficace » Les fonctionnement Les matériels ;  Pipettes pasteure  Boite de pétri  Lames / lamelles  Bouillon / gélose  Colorants / réactifs  Disques d’antibiotiques  Verrerie  Microscope  Pissettes Equipements ;  Autoclave : est un récipient dont le couvercle est glissé à l'intérieur de l'enveloppe du récipient et qui se ferme hermétiquement sous l'effet de la pression intérieure de la vapeur.  Centrifugeuse : est un appareil destiné à imprimer une accélération,  Hotte d'aspiration  Incubateur  Osmoseur (ou distillateur)  Réfrigérateur  Etuve  Four pasteur  Bain-marie Identifiction bacterienne Dif de ensemecment : En microbiologie : l’ensemencement est l’étape de transport entre votre milieu ou bactéries recherchées (repiquage, bouillon, …) et votre milieu de culture. Comme tout transport, une concurrence est présente pour déposer votre simple milieu mère. -------------------------------- c'est déposé dans un milieu de culture stérile des germes prélevés à partir d'1 culture mère ou pure. Matériel : Boite de pétri : , elle est utilisée en microbiologie pour la mise en culture de micro- organismes Gélose nutritive : est un milieu d'isolement non-sélectif. Pipette pasteur ( ou écouvillon stérile) : sont des tubes fins généralement en verre dont l'extrémité a été effilée . Technique ens. L’ensemencement, c’est-à-dire le transport des bactéries dans un milieu de culture neuf, doit être fait dans des conditions d’asepsie totale. Les cultures sont faites en milieux liquides ou en milieux solides. ----------------------------------------------- La technique d'ensemencement : Stériliser l'instrument servant à prendre la souche bactérienne d'origine (pipette dans le cas de bouillon, anse dans le cas d'une colonie) Prélever la souche à ensemencer. Stériliser l'ouverture du flacon de bouillon stérile. Etude macroscopique : La forme L’evation La taille Chromogénése Opacité Consistance Surface Odeur Examan d’etat frais defi C’est l’examen microscopique de bactéries vivantes, en milieu liquide. Il permet d’apprécier leur mobilité (ou immobilité) et leur morphologie. : -------------------------- permet d’examiner la mobilité des bactéries et d’en déceler la forme, bien que ce renseignement soit plus accessible sur des frottis colorés. Si la bactérie est sporulée, l’état frais permet également de mettre ce phénomène en évidence. Pour observer la mobilité, on doit prendre garde à ne pas détruire les flagelles bactériens lors du prélèvement et de la préparation de la lame. Techenique : 1. A partir d’une culture en milieu liquide : Déposer sur une lame propre soit le contenu d’une « anse de platine » soit « une petite goutte » à l’aide d’une pipette Pasteur. Recouvrir la goutte d’une lamelle. 2. A partir d’une culture sur milieu solide : Déposer une gouttelette de liquide (milieu liquide ou eau) sur la lame. Prélever une trace de culture à l’anse de platine et l’émulsionner dans le liquide. Recouvrir d’une lamelle. 3. Observer rapidement à l’objectif 40 en mettant la lumière au maximum mais en fermant le diaphragme -------------------------------------------------------------- *Déposer une petite goutte d’eau stérile sur la lame. *Prélever une fraction de colonies sur gélose. *Recouvrir d’une lamelle en évitant d’enfermer des bulles d’air. Le liquide ne doit pas déborder *Observer rapidement à l’objectif 40 en mettant la lumière au maximum mais en fermant le diaphragme Coloration de gram : Coloration de Gram : C’est la coloration de base en pratique bactériologique. Elle permet de reconnaitre les bactéries présentes et leur caractère « Gram-positif » ou « Gram-négatif » selon qu’elles ont gardé la coloration violette ou non. - Préparer et fixer une suspension de la souche bactérienne. - Recouvrir le frottis d’une solution de violet de gentiane ; laisser agir une minute. - Entrainer le violet par la solution de lugol. Recouvrir la lame de lugol et laisser agir 1minute sans laver à l’eau. - Décolorer aussitôt par l’alcool acétone ; pour cela, verser l’alcool à la surface de la préparation placée obliquement et observer sa couleur en s’écoulant, il est d’abord violet puis bleuté et enfin incolore ; arrêter à ce stade. - laver rapidement à l’eau courante (eau distillée). - Recouvrir la lame de solution de fuchsine et laisser agir 20 à 30 secondes. - Laver et sécher entre deux feuilles de papier filtre. - Observer en immersion. Les Gram+ (Gram positifs) apparaissent en violet-noir, les Gram- (Gram négatif) apparaissent en rose. ------------------------------------------------------- 1- La coloration de Gram A- Principe La coloration de Gram est la base de l’identification d’une souche bactérienne. Elle doit être parfaitement maîtrisée car c’est le point de départ du choix des examens complémentaires à effectuer, des milieux à ensemencer etc… La coloration de Gram est une coloration qui teste l’alcoolo résistance d’une souche bactérienne. En effet, les différences de coloration des bactéries reposent sur des différences de constitution de la paroi : Au terme du processus de coloration, les bactéries dites « Gram Négatives » apparaissent roses tandis que les bactéries dites « Gram Positives » sont colorés en bleu foncé/violet Les bactéries Gram négatives ont une paroi plus fine que celles à Gram positives. De plus, cette paroi est très riche en lipides (membrane externe de la paroi) dans laquelle l’éthanol est fortement soluble… Techniques de coloration : 2- Technique générale d’une coloration Toutes les colorations en bactériologie suivent un même principe qui peut se définir en 3 (éventuellement 4) étapes qui sont : - Etape de COLORATION (c’est le colorant qui donnera un résultat positif à la fin) - Une éventuelle étape de mordançage ou d’intensification de la coloration - Une étape de décoloration ou EPREUVE (c’est le caractère que l’ont cherche à mettre en évidence) - Une étape de CONTRE COLORATION qui permet d’observer les germes décolorés précédemment (donc c’est le colorant donnant un résultat négatif) Coloration au bleu de méthylene : Le bleu de méthylène est un colorant souvent utilisé en biologie. Il peut servir à colorer des bactéries pour les visualiser au microscope. Quand il entre dans le cytoplasme d'une cellule vivante, le bleu de méthylène est réduit car c'est un environnement réducteur : les cellules vivantes paraissent incolores ----------------------------------------- Introduction A l’inverse du Gram ou du Ziehl, elle n’apporte aucune information sur la nature des bactéries. La raison de cette utilisation est que c’est une coloration : très simple et rapide à effectuer, qu’elle colore toutes les bactéries à l’exception des mycobactéries, qu’elle respecte mieux la structure uploads/Geographie/ il-peut-s-x27-agir-de-prelevement-de-sang-de-peaux-d-x27-urines-de-selles-ou-de.pdf