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I. But : Rapp ort de TP de Micro biolog & Réalisé par : Ben Yacoub Bekir Tasnim

I. But : Rapp ort de TP de Micro biolog & Réalisé par : Ben Yacoub Bekir Tasnim Rayène Bio 2/1 Groupe 1 TP01 : Analyse microbiologique d’un aliment Etude de la qualité d’un aliment donné (Salami, yaourt, lait stérile) afin de s’assurer de sa conformité aux normes internationales. II. Principe : L’analyse des 3 aliments est basée sur 2 techniques :  Technique de dilution décimale : obtention de plusieurs dilutions (En allant de 10-1 à 10-6) à partir de l’échantillon.  Technique de dénombrement : Utilisation de plusieurs milieux de culture : Sabouraud : culture des champignons et moisissures. MRS : culture des bactéries lactiques. PCA : culture de la flore mésophile totale. MacConkey : culture des coliformes totaux et des coliformes fécaux. Remarque : Les résultats obtenus sont traduits à partir des normes du Codex Alimentarius. En effet, on distingue 2 types de normes :  Normes non chiffrées : absence ou présence des germes. m a M  Normes chiffrées : Selon un intervalle de la densité des microorganismes dans l’aliment : Plan d’échantillonnage de 3 classes : m a b M Acceptable Inacceptable (absence de germes pathogènes) ( présence de germes pathogènes) Satisfaisant Acceptable Non-satisfaisant La norme : c’est le seuil de tolérance entre l’excessif et le tolérant .c’est un intervalle entre une valeur minimale « m » et une valeur maximale « M » qui va définir si l’aliment est satisfaisant, acceptable ou non satisfaisant. «a» et «b» sont deux valeurs intermédiaires. III. Mode opératoire : 1) Prélèvement et échantillonnage : Représentatif + Homogène Pour les aliments liquides (Yaourt/Lait) : 10ml de chaque échantillon + 90ml d’eau physiologique Pour les aliments solides : On réalise 3 coupes à partir de régions différentes du solide (salami dans notre cas : 2 extrémités + centre), puis on broie le tout à l’aide d’un stomacher et on mélange tout (1+2+3). 1 2 3 On en prélève 10 g qu’on dissout dans 90 ml d’eau physiologique. 2) Dilution : On réalise la dilution jusqu’à 10-4 pour les solides et 10-2 pour les liquides. D 10-1 Il faut bien agiter pour assurer l’homogénéité du liquide Pour la détection de salmonelles : on prélève 25g/25ml 1mL 100 mL D 10-2 D 10-3 D 10-4 3) Ensemencement : Gélose Sabouraud Milieu Mac Conkey Milieu MRS (Bactéries lactiques)  On prélève à l’aide d’une micropipette 100µl de l’inoculum contenu dans le tube en question.  On étale la fraction prélevée sur toute la surface du milieu en gélose à l’aide d’un étaleur en verre stérilisé et on referme la boite de Pétri. Pour éviter la contamination , on trompe l’étaleur dans de l’alcool ,ensuite on le flambe et on l’étale sur le couvercle de la boite pour ne pas abimer la gélose. On le trompe dans l’alcool après utilisation. Gélose PCA  On prélève de même à l’aide d’une micropipette 100µl de l’inoculum contenu dans le tube en question.  On dépose la fraction prélevée dans une boite de Pétri initialement vide et stérilisée , on coule le milieu gélosé ( La PCA) maintenu en surfusion mais légèrement refroidi (à une température de 40°C pour que la Gélose ne prend pas en masse : elle garde son aspect liquide et pour qu’on puisse tenir la bouteille sans se brûler la main ).  On ferme la boite et on homogénéise le milieu en réalisant des mouvements circulaires sur la paillasse ( Rotation dans les 2 sens).  On laisse refroidir la gélose jusqu’à solidification. Le flambage est une étape nécessaire pour éviter toute contamination 9mL 9mL 9mL (Eau physiologique) En Surface : En Profondeur : 4) Incubation: On incube les diffèrentes boites dans l’étuve pendant 24 à 48heures selon les températures suivantes : PCA :30°C 40°C Mac Conkey : 30°C MRS : Sabouraud : Résultats : Pour le salami : Milieu Dilution Température Nombre de Colonies Sabouraud 10-1 10-2 10-3 10-4 30°C 5 0 0 MRS 10-1 10-2 10-3 10-4 37°C 0 0 0 PCA 10-1 10-2 10-3 10-4 30°C 0 0 0 MacConkey 10-1 10-2 10-3 10-4 30°C / 45°C 0 0 0 Pour le yaourt : Milieu Dilution Température Nombre de Colonies Sabouraud 10-1 10-2 30°C 0 0 MRS 10-1 10-2 37°C 5 PCA 10-1 10-2 30°C 0 0 MacConkey 10-1 10-2 30°C / 45°C 0 Pour le lait : Milieu Dilution Température Nombre de Colonies Sabouraud 10-1 10-2 30°C 0 0 MRS 10-1 10-2 37°C 8 1 PCA 10-1 10-2 30°C 0 0 MacConkey 10-1 10-2 30°C / 45°C 0 0 Pour le milieu MacConkey, l’incubation de 30°C se fait pour les coliformes totaux ; tandis que celle de 45°C se fait pour les coliformes fécaux. IV. Interprétation : uploads/Geographie/ microb-indus.pdf