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1ère STL Fiche technique n°28 RECHERCHE DE LDC, ODC (DECARBOXYLASES) ET ADH (DI

1ère STL Fiche technique n°28 RECHERCHE DE LDC, ODC (DECARBOXYLASES) ET ADH (DIHYDROLASE) 1. Intérêt La recherche des enzymes : - LDC : lysine décarboxylase - ODC : ornithine décarboxylase - ADH : arginine dihydrolase est d’une grande importance pour l’identification des bactéries de la famille des Enterobacteriaceae (bacille gram -, oxydase -) et d’autres bacilles Gram -. 2. Composition milieu semi-synthétique Composant Quantité (g/L) Rôle Arginine ou Lysine ou Ornithine 0,2 Lecture d’un caractère biochimique Extraits de levure 1 Apport de facteurs de croissance, vitamines…. Glucose en faible quantité 1 Source de carbone et d’énergie Pourpre de bromocrésol 5 Indicateur de pH NaCl 2 Maintien de l’isotonie pH 6,8 3. Principe Les enzymes ADH, LDC et ODC catalysent respectivement la décarboxylation de l’arginine, de la lysine et de l’ornithine présent dans le milieu.  cette dégradation aboutit à la formation de produits basiques ; l’alcalinisation du milieu est révélée par un virage de l’indicateur de pH (le pourpre de bromocrésol) à sa teinte basique (violette). NH2 R - CH + H+ + 1 e- R-CH2-NH2 + CO2 COO- amine décarboxylase dihydrolase 1ère STL Fiche technique n°28 On opère en milieu anaérobie et contenant une faible concentration de glucose.  l’acidification (due à l’utilisation du glucose) et l’anaérobiose sont des conditions favorables à la synthèse des décarboxylases.  dans un premier temps, la bactérie dégrade le glucose entraînant ainsi une acidification  dans un second temps, si elle possède l’enzyme correspondante, elle utilise l’arginine ou la lysine ou l’ornithine, entraînant une alcalinisation du milieu. 4. Ensemencement  Ensemencer le milieu avec une goutte de suspension bactérienne dense.  Agiter  Si le tube n’est pas plein, le recouvrir par de la vaseline stérile afin de placer le milieu en anaérobiose.  Incuber 24 heures à 37°C, le bouchon vissé complètement. 5. Lecture Observation Interprétation Conclusion Coloration jaune Il y a eu acidification du milieu liée à l’utilisation du glucose mais il n’y a pas eu réalcalinisation. Le substrat (arginine ; lysine ou ornithine) n’a donc pas été dégradé La bactérie ne possède pas l’ADH ou la LDC ou l’ODC Elle est dite ADH – ou LDC – ou ODC - Coloration violette Il y a eu acidification du milieu liée à la fermentation du glucose PUIS il y eu réalcalinisation du milieu liée à la dégradation du substrat (arginine ; lysine ou ornithine) par la bactérie La bactérie possède l’ADH ou la LDC ou l’ODC Elle est dite ADH + ou LDC + ou ODC + uploads/Geographie/ ldc-odc-adh1-pdf.pdf