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Pour CF et CT, E. coli Staphylococcus aureus Le genre Salmonella Listeria monoc

Pour CF et CT, E. coli Staphylococcus aureus Le genre Salmonella Listeria monocytogenes GAM et levure et Moisissures ASR LAB Jour 1 Lundi Préparation des milieux de culture et stérilisation du matériel nécessaire : - Stérilisation des boîtes de Petri, des cônes de 0,1 ml et de 1 ml (pour tous les germes) - Préparation des milieux suivants : VRBL (Pour les CF et CT). - Préparation du diluant (Eau Peptonnée Tamponnée: flacon de 90 ml et tubes à essai contenant 9 ml). - Préparation de la gélose EMB.. Préparation de la gélose inclinée de Citrate de Simmons. - Stérilisation des tubes à hémolyse.  Préparation de 90 ml de diluant et des tubes à essai de 9 ml de (EPT).  Préparation de la gélose de Baird Parker et stérilisation.  Stérilisation des tubes à hémolyse.  Préparation de Bouillon Cœur Cervelle (10 ml) et stérilisation. -Préparation de 90 ml d’EPT -Bouillon Rappaport Vassiliadis (des tubes de 10 ml). Préparation Gélose inclinée de Citrate de Simmons. - Préparation de bouillon Fraser demi et stérilisation (90 ml pour chaque aliment). - Préparation des tubes de 10 ml de bouillon Fraser. - Préparation de la gélose (Oxford). Préparation du milieu PCA. Préparation de diluant (90 ml) et des tubes de 9 ml. Préparation du milieu OGA Préparation du milieu TSC. Préparation du milieu MRS. Jour 2 Mardi Préparation des dilutions et Préparation des dilutions. Préparation de la suspension mère Préparation de la suspension mère Ensemencement de 1 ml des Ajouter le supplément et Préparation des dilutions Planning du déroulement de la première séance des TP de Microbiologie alimentaire Ensemencement des BP avec VRBL, incubation pdt 48h (30 et 45 °C). - Ajout de la solution de jaune d’œuf et de tellurite de potassium au milieu Baird- Parker, et couler en BP. - Ensemencement en surface de 0,1 ml des dilutions. - Incubation à 37 °C pdt 48h. (10 g + 90 ml) dans des sacs Stomacher et incubation à 37°C pdt 20h. 10 g + 90 ml de Bouillon Fraser demi avec son supplément) dans des sacs Stomacher et incubation à 30°C pdt 24h dilutions (ensemencement en profondeur), incubation) 30°C pdt 72 h. Ajouter le supplément du milieu OGA ensemencement en surface (incubation à 25 °C pdt 5 jours). le jaune d’œuf et couler en boite Petri, Ensemencem ent de 0,1 ml des dilutions (Méthode de double couche) et incubation à 37 °C pdt 24h en anaérobiose. et ensemencem ent en surface. Incubation à 37°C pdt 48h. Jour 3 Mercr edi 0,1 ml dans 10 ml de RVS - Bouillon Rappaport Vassiliadis) et incubation pendant 48 heures à 43°C. -Ensemencement de 0,1 ml du bouillon demi- Fraser dans des tubes de 10 ml de Fraser avec son supplément, incubation à 30°C pendant 48h. Lecture de résultats. Jour 4 jeudi Dénombrement Vérification d’E. Coli Repiquage de quelques colonies de CF sur EMB et incubation pendant 24h à 37°C. Coloration de Gram des colonies caractéristiques. Repiquage des colonies caractéristiques dans les tubes de BCC, incubation à 37°C pdt 24h. Lecture des résultats : Dénombrem ent. Test de Gram. Test de catalase. Repiquage des colonies de LAB dans des boites de MRS pour purification (incubation) Jour 5 vendr edi Recherche Indole (recherche de l’Indole) : Ajout de 0.5 ml de réactif de Kovacs et lecture de résultats. Lecture des résultats immédiats Recherche de l’utilisation du citrate Ensemencement du milieu Citrate de Simmons, incubation à 37°C pdt 24h. Mélanger 0,5 ml des tubes BCC avec 0,5 ml de plasma de lapin dans des tubes à hémolyses stériles, incubation à 37 °C pdt 2h. Lecture des résultats. Présence ou absence d’un caillot dans le culot du tube. Préparation de la Gélose SS et la Gélose Hektoen (ne pas autoclaver) Ensemencement par cadrans sur la surface de la gélose SS. Et sur la gélose Hektoen Et incubation à 37 °C pdt 48h. Ensemencement dans des Boîtes de milieu Oxford (enrichissement primaire et secondaire), incubation à 30°C pdt 48h. Un deuxième repiquage et test de Gram et de Catalase. Jour 6 lundi Recherche de l’utilisation du citrate Lecture de résultats. Lecture des résultats : Colonies caractéristiques (voir polycopié). Repiquage des colonies suspectes sur GN pour une identification (incubation à Lecture des résultats : Colonies caractéristiques (voir polycopié) Identification : Coloration de Gram et Test de catalase. Dénombrement des levures et des moisissures. Un troisième repiquage (test de Gram et catalase). Préparation des produits pou r les probiotiques: - MRS 37°C pdt 24h) - 16 tubes à essai stériles - PBS stérile 1 L) - 128 tubes à essai de l’eau physiolo gique. - Préparati on 500ml GN. - Stérilisat ion 32 Boites de Petri. - Pipette stérile. - Cônes bleu et jaune. Jour 7 Mardi Coloration de Gram.  Recherche urée-indole Ensemencement milieu Urée- indole et - Séance 2 : Test Probiotique Voir polycopié incubation 24h à 37°C. Recherche de l’utilisation du citrate : Ensemencement du milieu Citrate de Simmons, incubation à 37°C pdt 24h. Jour 8 Mercr edi Lecture de résultat : Voir polycopié. uploads/Geographie/ planning-de-tp-de-microbiologie.pdf