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Université Mohammed V - Rabat Ecole Supérieure de Technologie Département Génie

Université Mohammed V - Rabat Ecole Supérieure de Technologie Département Génie Urbain et Environnement Filière : Génie Bio Industriel Stage technique Réalisé par : Meryem EL FAQUIRE Intitulé : La méthode de chromatographie liquide à haute performance (HPLC) pour le contrôle des médicaments vétérinaires Réalisée par : Encadré par : El faquire Meryem Pr . M.Mounaim Halim EL JALIL Mr. Ali TALMI Département de chimie Année universitaire 2018-2019 1 Dédicaces Je dédie cet humble travail : A ma très chère mère : tu représentes pour moi le symbole de la bonté par excellence, la source de tendance et l’exemple du dévouement Qui n’a pas cessé de m’encourager et de prier pour moi. A mon cher père, aucune dédicace ne saurait examiner l’amour, l’estime, le dévouement et le respect que j’ai toujours eus pour vous. Puisse dieu tout puissant vous garder et vous procurer santé et bonheur Je dédie aussi ce travail à : Mes frères (Oussama , Saâd et Mohammed Toufik ) . Ma grand mère Aicha Tous mes amis en Souvenir des plus beaux instants qu'on a passé ensemble. Aussi bien à tous ceux qui m'ont aidé Merci …. Meryem Remerciement Au terme de ce travail, nous nous tenons à remercier : 2 Mon encadrant le professeur Mr. M. El jalil, Vous avez bien voulu nous confier ce travail riche d’intérêt et nous guider à chaque étape de sa réalisation. Vous avez toujours réservé le meilleur accueil, malgré vos obligations professionnelles. Vos encouragements inlassables, votre amabilité, votre gentillesse méritent toute admiration. Nous avons saisi cette occasion pour vous exprimer notre profonde gratitude tout en vous témoignant nos respects, nous remercions également les membres de jury pour leur présence, leur faveur et leur examination de notre rapport, veuillez, messieurs, accepter notre plus profond respect. M. Talmi Ali chef de la section chimie nous avons eu le privilège de travailler parmi votre équipe et d’apprécier vos qualités et vos valeurs. Votre sérieux, votre compétence et votre sens du devoir nous ont énormément marqués. Veuillez trouver ici l’expression de nos respectueuses considérations et notre profonde admiration pour toutes vos qualités scientifiques et humaines. Tout le personnel de la Division de la Pharmacie et des Intrants Vétérinaires qui ont mis à notre disposition toutes les informations et les connaissances nécessaire pour notre formation et aussi qui nous ont permis d’effectuer cette période de stage dans d’excellentes conditions. Que tous ceux qui nous ont aidés de près ou de loin, trouvent ici l’expression de notre sincère reconnaissance. 3 Résume Ce travail présente des généralités sur les médicaments vétérinaires , la technique de dosage par chromatographie liquide à haute performance (HPLC) d'un antibiotique utilisé en médecin vétérinaire notamment l'Enrofloxacine . Les résultats de cette technique a été présenté sous forme des chromatogrammes (des pics) de la molécules d'Enrofloxacine par le logiciel chromera au niveau de l'HPLC et détermine sa quantité dans le médicament pour la conformité selon la marge indiquée dans le dossier du fabriquant . Abstract This work presents generalities on veterinary drugs, the technique of determination by high performance liquid chromatography (HPLC) of an antibiotic used in veterinary medicine including Enrofloxacine. The results of this technique were presented in the form of chromatograms (peaks) of Enrofloxacine molecules by chromera software at the level of HPLC and determines its amount in the drug for compliance according to the margin indicated in the record of the manufacturer. Liste des abréviations ACN : Produit chimique l'Acétonitrile . 4 DPIV : Division de Pharmacie et des Intrants Vétérinaires . ENR : Enrofloxacine . E1-E2 : l'échantillon 1 et 2 . HPLC : High Performance Liquid Chromatography - Chromatographie Liquide à Haute Performance . S1-S2 : Standard 1 et 2 . UV : Ultra Violet-Visible . Liste des tableaux Tableau 1 : Propriétés physico-chimiques l’Enrofloxacine Tableau 2 : Propriétés pharmacocinétiques de l’ENR Tableau 3 : Conditions chromatographiques pour l’injection de l’ENR Liste des figures Figure 1: Organigramme de la DPIV . 5 Figure 2: Molécule de l’Enrofloxacine. Figure 3 : Principe de fonctionnement d’une chaine HPLC. Figure 4 : Les organes d’une chaine HPLC. Figure 5: une pompe HPLC. Figure 6: Injecteur HPLC. Figure 7: Une colonne HPLC. Figure 8 : Détecteur UV HPLC. Figure 9 : Composition du médicament à contrôler. Figure 10 : les fioles de la dilution du standard et les échantillons. Figure 11 : Viales contenant les 4 injections ( S1, S2 , E1, E2 ). Figure 12 : injection des viales dans l'HPLC . Figure 13 : Purgation de la pompe et la colonne . Figure 14 : la séquence et la méthode de l'Enrofloxacine. Figure 15 : pic du standard . Figure 16 : pic de l'échantillon. Figure 17 : Rapport analytique des résultats de contrôle de ENR. Figure 18 : Résultats finals de standard et d’échantillon de ENR. Table des matières Introduction…………………………………………………………………………………9 1 . Présentation de l'office National de Sécurité Sanitaire des produits Alimentaire (ONSSA)……………………………………………………………………..10 2 . Présentation de la division de la pharmacie et des Intrants vétérinaires (DPIV) ……………………………………………………………………………………….10 6 Synthèse bibliographie I. Généralités sur les médicaments vétérinaires……………………………………13 1. Définitions d’un médicament vétérinaire……………………………………………...13 2. Eléments constitutifs du médicament………………………………………………….13 2.1.Définition d'un principe actif………………………………………………………...13 2.2.Définition d'un excipient……………………………………………………………..13 3.Les Antibiotiques……………………………………………………………………….14 II. L'Enrofloxacine…………………………………………………………………………14 1. Les antibiotiques quinolones…………………………………………………………...14 2.Définition générale……………………………………………………………………….14 3.Propriétés physico-chimiques…………………………………………………………..15 4.Activité et susceptibilité………………………………………………………………….15 5.Propriétés pharmacocinétiques…………………………………………………………16 6.Surdosage/Toxicité aigué………………………………………………………………..17 III. Généralité sur la chromatographie……………………………………………..….17 1. Principe…………………………………………………………………………………...17 2.Classification selon le phénomène chromatographique…………………….............18 - la chromatographie d'adsorption…………………………………………….…….18 - la chromatographie de partage……………………………………………………18 - la chromatographie d'échange d'ions……………………………………………..19 - la chromatographie d'exclusion……………………………………………..…….19 Matériels et Méthode I. Chromatographie liquide à haute performance (HPLC)………………………....21 1. Définition……………………………………………………………………………...…..21 2. Principe de la HPLC……………………………………………………………………..21 3. Appareillage de la HPLC………………………………………………………………..22 a) Le réservoir de la phase mobile…………………………………………………….23 b) Le système de pompage…………………………………………………………….23 c) L'injecteur……………………………………………………………………………...24 d) La colonne…………………………………………………………………………….24 e) Détecteur UV………………………………………………………………………….25 f) L'enregistreur…………………………………………………………………………..26 g) Intégrateur……………………………………………………………………………..26 h) Contrôle par HPLC……………………………………………………………….......26 II. Dosage d'Enrofloxacine dans un médicament vétérinaire par HPLC………..27 1. Introduction……………………………………………………………………………….27 2.Verrerie………………………………………………………………………….…………27 3.Appareillage……….………………………………………………………………………27 4. Produits chimiques et réactifs……………………………………….…………………28 5. Conditions chromatographiques…………………………………….…………………28 6. Préparation et injection………………………………………………………………….28 7. Expression des résultats………………………………………………………………..31 Résultats discussions 7 I. Interprétation des résultats du dosage d'Enrofloxacine…………………….…..33 1. Introduction…………………………………………………………………………........33 2. Résultats des injections…………………………………………………………………33 3. Décision…………………………………………………………………………………..35 4. Discussion………………………………………………………………………..………35 Conclusion…………………………………………………………………………………36 Références………………………………………………………………………………...37 Introduction En élevage des animaux, toute pathologie infectieuse d’origine bactérienne est potentiellement dangereuse fait courir un grave risque sanitaire et économique à l’éleveur . Donc il sera nécessaire d’utiliser des antibiotiques à la fois pour des traitements curatifs ou encore préventifs afin de maintenir les troupeaux en bonne santé. (1) Pourtant son usage doit être strictement contrôlé car, s'il doit avant tout être efficace, il ne doit 8 constituer en aucun cas un risque ni pour l'animal, ni pour le consommateur des denrées animales ou d'origine animale, ni pour l'environnement. (2) Pour s’assurer de la qualité, l’efficacité et la sécurité du médicament, Il est nécessaire d’effectuer un contrôle analytique des différentes substances contenues dans la forme pharmaceutique en question. (3) Le contrôle des produits vétérinaires commence par l’adoption légale des définitions des différents produits utilisés (vaccins, antibiotiques, désinfectants, vitamines, antiparasitaires etc.) et des conditions de leur importation ou de leur fabrication s’ils sont élaborés dans le pays. C’est pourquoi les produits vétérinaires font l’objet d’un enregistrement officiel avant toute autorisation de commercialisation . Les travaux de laboratoire consistent à effectuer des tests galéniques et organoleptiques, à identifier et à doser les principes actifs par technique chromatographique HPLC, de chaque échantillon reçu . Ce travail fait partie des activités de la DPIV, service du contrôle et des expertises, section chimie à l’ONSSA. Il porte sur le contrôle d’une méthode d’analyse de l’Enrofloxacine, il comprend trois chapitres • Le premier chapitre, rapportant des généralités sur les médicaments vétérinaires ; , • Le deuxième chapitre est consacré aux conditions expérimentales : matériel et méthode qui présente notre plus grand intérêt ; • Le troisième chapitre rapportant les résultats de la méthode du contrôle de l’Enrofloxacine par HPLC . 1 . Présentation de l’office National de sécurité Sanitaire des produits alimentaires (ONSSA) : L’Office National de Sécurité Sanitaire des Produits Alimentaires (ONSSA) est un établissement public doté de la personnalité morale et de l’autonomie financière crée en 2009 par la loi n° 25-08 et placé sous la tutelle de l’Etat. Il exerce, pour le compte de l’Etat, les attributions relatives à la protection de la santé du consommateur et à la préservation de la santé des animaux et des végétaux . Il est appelé à appliquer la politique du gouvernement en matière de sécurité sanitaire des végétaux, des animaux et des produits alimentaires depuis les matières premières jusqu’au 9 consommateur final, y compris les aliments pour animaux . L’ONSSA a été créé pour appuyer les orientations stratégiques tracées par le Plan Maroc Vert qui ambitionne de faire de l’agriculture un moteur de croissance essentiel dans l’économie marocaine, ainsi de rendre les produits alimentaires plus compétitifs aussi bien sur le marché national qu’international . 2.Présentation de la Division de la pharmacie et des intrants vétérinaire (DPIV): La division de la pharmacie et des intrants vétérinaires est rattaché à la direction des services vétérinaires de l’ONSSA. Elle comprend deux services : *Le service de l’enregistrement et des inspections . *Le service uploads/Geographie/ rapport-meryem.pdf