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République Algérienne Démocratique et Populaire Ministère de l’enseignement Sup

République Algérienne Démocratique et Populaire Ministère de l’enseignement Supérieur et de la recherche Scientifique Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie, et des Sciences de la Terre et de l’Univers Département de Biologie Laboratoire Antibiotiques Antifongiques : Physico-chimie, Synthèse et Activité Biologique Mémoire En vue de l’obtention du diplôme de Master en Biologie Option : Biochimie Appliquée Thème: Contribution à l’étude phytochimique et à l’effet antioxydant des extraits d’algue verte: Ulva linza Présenté Par : M elle TEFIANI Ikram Soutenu le : 14/ 06 /2015 Devant le jury composé de :  Mr DJAZIRI R. Professeur Président  Mme BENMANSOUR M.M.A.A Examinatrice  Mme MERGHACHE D. M.A.A Examinatrice  Melle BENARIBA N. M.C.B Promotrice Année Universitaire : 2014- 2015 Résumé L’objectif de cette étude est porté sur l’étude phytochimique de différents extraits d’Ulva linza : extrait méthanolique, eau-méthanolique, n-butanolique, méthanol 1 (EM1) et acétate d’éthyle ainsi que l’évaluation de l’activité antiradicalaire de ces extraits sur le radical libre le DPPH. Le screening phytochimique a révélé la présence d’alcaloïdes et sucres réducteurs dans les extraits méthanoliques et eau-méthanol. Les résultats du dosage de polyphénols et de flavonoïdes totaux montrent que l’extrait eau-méthanol est plus riche par rapport aux autres extraits en composés polyphénoliques et en flavonoïdes avec un taux de 38,84 µg.Eq acide gallique par mg d’extrait et 23,83 µg.Eq catéchine par mg d’extrait, respectivement. En ce qui concernel’activité antioxydante, les extraits eau-méthanol (EEM) et méthanolique (EM1) ont pu réduire 50% et 12%du DPPH à une concentration de 0,9 et 0,675 mg/ml respectivement. 0,00185 mg/ml de l’acide ascorbique réduit 50% du DPPH. Ce pouvoir antioxydant peut être dû à la présence de polyphénols et de flavonoïdes dansUlva linza, ce qui incite l’étude in vivo de l’effet des extraits de cette algue sur le stress oxydatif. Mots clés : Ulva linza, activité antiradicalaire, polyphénols. Table de matière Introduction……..………………………………………………………………………….....1 Synthèse bibliographique…………………………………………………………………….3 Matériels et méthodes 1. Matériel végétal…………………………………………………………………….....33 2. Préparation des extraits……………………………………………………………….33 2.1.Préparation de l’extrait méthanolique 1 et n-butanolique 1……………………....33 2.2.Préparartion de l’extrait méthanolique 2………………………………………….34 2.3.Préparation de l’extrait acétate d’éthyle et n-butanolique 2……………………....34 2.4.Préparation de l’extrait eau-méthanol…………………………………………….35 3. Tests phytochimiques ............................. ............................................................................ 37 4. Dosage de polyphénols et flavonoïdes totaux.................................................................... 38 4.1. Préparation des extraits …………… ..........................................................................38 4.2.Dosage des polyphénols totaux…………………………………………………..39 4.3.Dosage de flavonoïdes totaux ......... ............................................................................ 41 5. Le pouvoir antioxydant des extraits d’Ulva linza .............................................................43 5.1.Principe de la méthode DPPH ......... ............................................................................ 43 5.2.Mode opératoire ................................ ............................................................................43 5.3.Expression des résultats ................... ............................................................................ 45 5.3.1. Pourcentage de réduction du DPPH ............................................................... 45 5.3.2. Détermination IC50 ............. ............................................................................45 Résultats et interprétation 1. Les rendements des extraits d’Ulva linza..........................................................................46 2. Tests phytochimiques….................................................................................................... 47 3. Dosage des polyphénols et flavonoïdes totaux .................................................................48 4. Activité antiradicalaire des extraits d’Ulva linza ............................................................. 49 Discussion ..................................................................................................... 54 Conclusion ..................................................................................................... 57 Références bibliographiques ..................................................................................................... 58 Remerciements Je remercie DIEU tout puissant, maître des cieux et de la terre, qui m’a permis de mener à bien ce travail. Tout d'abord je tiens surtout à adresser mes plus vifs remerciements à MelleBenariba N., maître de conférences au Département de Biologie, Faculté des sciences de la nature et de la vie,qui m’a fait l’honneur de réaliser ce travail sous sa direction, pour sa grande patience, pour sa disponibilité et ses conseils judicieux. J’adresse mes remerciements à Mr Djaziri R., professeur au Département de Biologie, Université Abou Bekr Belkaïd-Tlemcen, d’avoir accepté de présider le jury. Je tiens à remercier Mme Merghache D, maître assistante au Département de Biologie, Université Abou Bekr Belkaïd-Tlemcen, qui m’a fait l’honneur d’examiner ce travail. Mes profonds remerciements vont à Mme Benmansour M., maître assistante chargée de cours, au Département de Biologie, Faculté des sciences, Université de Tlemcen, qui m’a fait l’honneur d’examiner ce travail. Merci au jury,Mr Lahfa F, MrAzzi R et Mr Rahmoun N d’avoir accepté d’évaluer ma synthèse bibliographique. Mes remerciements s’adressent à Mme Boucherit Z. Professeur au Département de Biologie, Université Abou Bekr Belkaïd-Tlemcen, et directrice du Laboratoire Antibiotiques, Antifongiques : Physico-chimiques, Synthèse et activité biologique, pour son accueil au laboratoire et sa disponibilité. Je tiens à remercier tous les enseignants du Département de biologie, Faculté des sciences, Université de Tlemcen, qui ont veillé sur notre formation. Mes remerciements s’adressent également à tous membres du Laboratoire Antibiotiques, Antifongiques : Physico-chimiques, Synthèse et activité biologique, qui ont contribué de près ou de loin à la réalisation de ce travail. J’adresse, enfin et surtout, ma plus profonde gratitude et tout mon amour à ma famille, qui a su me faire confiance et me soutenir en toutes circonstances, ainsi qu’à tous mes proches amis qui m’ont toujours soutenu et encouragé même dans les périodes les plus difficiles. Un grand merci à tous. Dédicaces A l’aide de dieu tout puissant, qui m’a tracé le chemin de ma vie, j’ai pu réaliser ce travail que je dédie : ♥A mes chers parents ♥ ♥A ma famille ♥ ♥A mes professeurs ♥ ♥A mes amis ♥ ♥A vous ♥... Ikram Liste des figures Figure 01 : Mécanisme réactionnel intervenant lors du test FRAP entre le complexe tripyridyltriazine ferrique Fe(III)-TPTZ et un antioxydant (AH)……………………………11 Figure 02 : Structure du radical-cation ABTS+°…………………………………………….13 Figure 03: Mécanisme réactionnel entre l’espèce radicalaire DPPH• et un antioxydant (AH)…………………………………………………………………………………………..14 Figure 04: Algue verte……………………………………………………………………….25 Figure 05: Algue bleu………………………………………………………………………..25 Figure 06: Algue rouge………………………………………………………………………26 Figure 07: Algue brune………………………………………………………………………26 Figure 08: Ulva linza…………………………………………………………………………28 Figure 09:Les thalles d’Ulva linza……………………………………….………………….33 Figue 10: Schéma explicatif de la préparation de différents extraits organiques à partir d’algue verte, Ulva linza……………………………………………………………………………….34 Figue 11: Forme libre et réduite du DPPH…………………………………………………..48 Figure 12: Courbe étalon de l’acide gallique………………………………………………...48 Figure 13: Courbe étalon de la catéchine……………………………………………………48 Figure 14: réduction du DPPH par l’acide ascorbique………………………………………50 Figure 15 : réduction du DPPH par l’extrait méthanol 2……………………………………52 Figure 16: réduction du DPPH par l’extrait méthanol 1……………………………………52 Figure 17: réduction du DPPH par l’extrait n-butanol 1…………………………………….52 Figure 18: réduction du DPPH par l’extrait eau-méthanol………………………………….52 Liste des tableaux Tableau 01: Caractéristiques importantes des groupes d'algues……………………………..23 Tableau02 : composition chimique et biochimique d’ulva linza………………………........29 Tableau 03: Dosage de polyphénols totaux dans les extraits d’Ulva linza…………………..40 Tableau 04: Dosage de flavonoïdes totauxdans les extrais d’Ulva linza……………………42 Tableau 05: Mode opératoire pour mesurer l’activité antiradicalaire des extraits d’Ulva linza par la méthode du DPPH……………………………………………………………………..44 Tableau 06: Les rendements des extraits d’Ulva linza……………………………………….46 Tableau 07: Screening phytochimique des extraits d’Ulva linza…………………………...47 Tableau 08 : Taux de polyphénols et de flavonoïdes totaux dans les extraits d’Ulva linza…………………………………………………………………………………………...49 Tableau 09: Pourcentages de réduction du DPPH par la vitamine C………………………..50 Tableau 10: Pourcentages de réduction du DPPH par les extraits d’Ulva linza……………..51 Tableau 11: IC50 d’extrait eau-méthanol d’Ulva linza et de la vitamine C…………………53 Liste des abréviations AAPH: 2,2’-azo-bis (2-amidinopropane) dichlorhydrate ABTS: Acide 2,2’- azinobis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonique ADN: acide désoxyribonucléique. AGPI: Acide gras polyinsaturé AH: Antioxydant BAP: 2,2-azo-bis (2-amidinopropane) chlorhydrate Cu2+: Cuivre CUPRAC: Capacité antioxydante par réduction de cuivre DEPG: N, N-dimethyl-p-phenylene diaminedihydrochloride DPPH: Diphenyl-picrylhydrazyle ERO: Espèces réactives de l’oxygène EAC: Extrait acetate d’éthyle EEM: Extrait eau-méthanol EM1: Extrait méthanolique 1 EM2: Extrait méthanolique 2 FRAP: Ferric ion Reducing Antioxydant Parameter FTC: Thiocyanate ferrique GPX: Glutathion péroxydase GSH: Glutathion réduit GSSG: Glutathion oxydé H2O2: Peroxyde d’hydrogène HPTLC: Chromatographie liquide à haute performance LAPSAB: Laboratoire, antibiotique, antifongique: Physico-chimie, Synthèse et Activité Biologique. LDL: Low density lipoproteins M: Cation métallique MDA: Malondialdéhyde MPO: Myéloperoxydase n-B1: Extrait n-butanol 1 n-B2: Extrait n-B2 NADP: Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate NBT2+: Nitro-Blue Tétrazolium Nc: Néocuproine NO.: Oxyde nitrique NO2: Dioxyde de l’azote NO2 -: Nitrate N2O3: Anhydride nitreux NOS: NO synthase NOSmt: NO synthase mitochondriale NO3: Nitrate O2 .- : Anion superoxyde O2 1: Oxygène singulet OH.: Radical hydroxyle OMS: Organisation mondiale de santé ONOO-: Peroxynitrite ORAC: Oxygène Radical Absorbance Capacity PIXE: Emission de particules induite par rayons X PMNs: Polymorphonucléaires ppm: partie par million PS: poids sec ROO: radical peroxyle ROOH: Peroxydes lipidiques RPO: Résonance paramagnétique électronique SOD: Superoxyde dismutase TBA: Acide thiobarbiturique TBARS: Substances réagissant avec l’acide thiobarbiturique TEAC: Trolox equivalent antioxidant capacity TRAP: Total Radical -Trapping Antoxydant Parameter UI: unité internationale UV: Ultraviolet XO: Xanthine oxidase 4-HNE: 4- hydroxynonenal 8-OH-dG: 8-hydroxy-2’ désoxyguanosine β-PE: β phycoérythrine Introduction Introduction 1 Radicaux libres, espèces réactives de l’oxygène (ERO), stress oxydant et antioxydants sont devenus des termes familiers tant dans le monde médical que dans le grand public. Au début des années 2000, ces notions n’étaient généralement évoquées que dans les congrès scientifiques. Mais ces dernières années, l’industrie pharmaceutique, les laboratoires d’analyses médicales et la presse grand public ont massivement diffusé des informations relatives aux antioxydants (Haleng et al., 2007). Le stress oxydant peut être défini comme un déséquilibre prononcé entre les prooxydants et les antioxydants (Barouki, 2006). Lorsque un des systèmes projectifs de l’organisme contre la toxicité des radicaux libres montre un échec, l’action des radicaux libres devient incontrôlable, ce qui conduit à des dommages au niveau des molécules, des cellules, des organes et potentiellement à la mort de l’organisme (Durackova et al., 2008). Le stress oxydant est impliqué dans de nombreuses pathologies, incluant l’obésité, le diabète, l’athérosclérose, le vieillissement, le cancer, la cataracte, la sclérose latérale amyotrophique, le syndrome de détresse respiratoire aigu, l’œdème pulmonaire, Alzheimer, les rhumatismes et les maladies cardiovasculaires (Mohammedi, 2013). Pour se protéger des uploads/Geographie/ tefiani-ikram.pdf