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Spécialité : C.Q.I.A.A Module : Préparation pour analyses microbiologique Thème

Spécialité : C.Q.I.A.A Module : Préparation pour analyses microbiologique Thème : La Stérilisation de la verrerie Enseignant : insfp souk ahras Objectif opérationnel : Matériels et outils utilisés STAGIAIRE PROFESSEUR Autoclave Four pasteur Bec Bunsen Allumette Verreries Pipette, Tableau Marqueur Autoclave Four pasteur Bec Bunsen Allumette Aides pédagogiques : ………………………………………………………………………………………………………………………………. .. Bibliographie : …………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………………………….. FICHE TECHNIQUE A la fin de la séance le stagiaire sera capable d’appliquer les méthodes de désinfection de paillasse et de la stérilisation de la verrerie à partir de produits et de matériels spécifiques, et sans faute Date : 28/11/2018 Cours : 1 TP no : 2 Temps alloue :4h00mn Temps ecoule Verreries pipette, flacon, coton, papier aluminium, pissette eau de javel flacon, coton, papier aluminium, pissette eau de javel Plan de leçon Enseignant Stagiaires ➢ Rappel ➢ Centre d'intérêt Est-ce que le nettoyage de paillasse et de verreries est suffisant pour commencer les analyses ? si non pourquoi ? ➢ Titre du cours Les méthodes de stérilisation de verreries ➢ Objectif opérationnel « A la fin de la séance le stagiaire sera capable d’appliquer……… » ➢ Réponses justes ➢ Les stagiaires essayent de répondre Oui, Non ➢ Les stagiaires s’intéressent et suivent ➢ Répétition de l’objectif opérationnel par quelques stagiaires. ➢ Mise en difficulté 01 Comment désinfecter la paillasse ➢ Explication et démonstration 01 1. La désinfection du paillasse • Produit utilisé NB : Suivez les consignes de sécurité ➢ Exécution partielle N°1 : ➢ Les stagiaires essayent de répondre juste Nettoyage avec l’eau chaude, et les détergents ➢ Attention et concentration ➢ Les stagiaires exécutent. ➢ Mise en difficulté 02 Comment stériliser la verrerie avant l’utilisation ➢ Explication et démonstration 02 2. La stérilisation avant l'utilisation de verrerie. (Four pasteur, autoclave) • Matériels utilisés NB : Suivez les consignes de sécurité ➢ Les stagiaires essayent de répondre juste Avec le stérilisateur. ➢ Attention et concentration ➢ Exécution partielle N°2 : ➢ Les stagiaires exécutent ➢ Mise en difficulté 03 Comment stériliser la verrerie avant l’utilisation ➢ Explication et démonstration 03 3. La stérilisation au cours de l'utilisation de verrerie : le flambage • Matériels utilisés NB : Suivez les consignes de sécurité ➢ Exécution partielle N°3 ➢ Les stagiaires essayent de répondre juste Avec le stérilisateur. ➢ Attention et concentration ➢ Les stagiaires exécutent ➢ Évaluation finale Réappliquez les méthodes de stérilisation. ➢ Les stagiaires exécutent sans faute La désinfection et la stérilisation de la verrerie 1. La désinfection du paillasse a) Laver la surface à nettoyer avec un détergent : Ainsi l’action du désinfectant sera uniquement dirigée sur la destruction des microbes ; les microorganismes privés de substances nutritives par le nettoyage ont plus de difficultés à se reproduire. b) Rincer le détergent pour éviter des interactions avec le désinfectant ou l’antiseptique ; c) Passer le désinfectant (un chiffon imbibé d'eau de Javel). 2. La stérilisation avant l'utilisation de verrerie. (Four pasteur, autoclave) a) LE FOUR PASTEUR C'est un four - étuve à air chaud et sec. Il est utilisé pour la stérilisation de la verrerie vide (tubes à essai, boîtes de Pétri, tubes à culture et bouchons, pipettes Pasteur et récipients divers). La verrerie à stériliser doit être propre et parfaitement sèche, éventuellement bouchée avec du coton et emballée dans du papier solide. Elle est alors disposée à l'intérieur du four et subit un chauffage de : - 30 minutes à 1 heure à 170° - 180°C ou 2 heures à 160°C ce qui a pour but d'éviter le brunissement du coton. Le matériel ainsi stérilisé sera laissé dans l'étuve jusqu'à son refroidissement complet, puis stocké à l'abri des poussières. Pour ces opérations, compte tenu des températures relativement élevées, il est conseillé d'utiliser le plus possible de la verrerie de type "pyrex". b) L'AUTOCLAVE C'est un appareil très performant qui est indispensable dans une unité de microbiologie. Il est utilisé pour stériliser les milieux de culture neufs ou souillés, mais peut également stériliser tout autre matériel de microbiologie. Le chauffage a lieu sous pression de vapeur d'eau, à une température de 100° à 130°C, pendant une durée qui varie en fonction du milieu, de la température utilisée et du volume des récipients. 3. La stérilisation au cours de l'utilisation de verrerie : le flambage Il est basé sur l'emploi du bec Bunsen. Cette méthode est utilisée pour la stérilisation extemporanée (pour utilisation immédiate) du matériel de manipulation : extrémité de l'öse, extérieur des pipettes Pasteur et pipettes graduées, col des tubes à essai, tubes contenant des milieux de culture, erlenmeyers et flacons divers, étaloirs .... Il est à noter que le bec Bunsen, réglé avec une flamme bleue, la plus chaude, crée une zone de stérilité d'un diamètre d'environ 20 cm, par ascendance de l'air de cette zone. Toutes les manipulations d'ouverture de tubes et boîtes de culture, d'ensemencement, devront être réalisées dans ce diamètre. Pour que cette zone soit effectivement stérile, les courants d'air et déplacements de personnes sont à proscrire. ➢ Évaluation finale Réappliquez les méthodes de stérilisation uploads/Industriel/ ppam-cours-2 1 .pdf