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MINICAP HEMOGLOBIN(E) Ref. 2207 Ref. 2227* 2008/07 - 1 - MINICAP HEMOGLOBIN(E)

MINICAP HEMOGLOBIN(E) Ref. 2207 Ref. 2227* 2008/07 - 1 - MINICAP HEMOGLOBIN(E) - 2008/07 UTILISATION Le kit MINICAP HEMOGLOBIN(E) permet la séparation en milieu basique (pH 9,4) des hémoglobines du sang humain (A, F et A2) et la détection des principales hémoglobines anormales (notamment S, C, E et D) par électrophorèse capillaire dans le système automatique MINICAP. Le système MINICAP permet de réaliser toutes les séquences de l’électrophorèse jusqu’à l’obtention du profil des hémoglobines pour l’analyse qualitative ou quantitative. L’analyse peut être réalisée sur l’hémolysat de globules rouges sédimentés, centrifugés ou lavés ; en effet, le lavage des globules rouges n’est pas indispensable. Les hémoglobines, séparées dans des capillaires en silice fondue, sont détectées directement au niveau d’une cellule sur le capillaire par spectrophotométrie d’absorbance à 415 nm, longueur d’onde d’absorption spécifique des hémoglobines. Les profils électrophorétiques sont analysés visuellement pour détecter les anomalies. La détection directe donne automatiquement une quantification relative précise de chaque fraction individualisée dont les hémoglobines présentant un intérêt particulier, telles que l’hémoglobine A2 pour le diagnostic des ß thalassémies. De plus, la bonne séparation des différentes fractions permet de détecter des variants de l’hémoglobine, en particulier, de différencier l’hémoglobine S de l’hémoglobine D, et l’hémoglobine E de l’hémoglobine C. La quantification de l’hémoglobine A2 est également possible en présence d’hémoglobine E. À usage in vitro exclusivement. PRINCIPE DU TEST L’hémoglobine est une molécule complexe composée de quatre chaînes polypeptidiques, identiques deux à deux, chaque chaîne étant liée à l’hème, noyau tétrapyrrolique (porphyrine) lié à un atome de fer. L’hème est commun à toutes les hémoglobines. La partie protéique responsable du type d’hémoglobine est appelée globine. On connaît principalement les chaînes polypeptidiques α, ß, δ et γ. Chez l’homme, on peut trouver les hémoglobines normales suivantes : • Hémoglobine A............................................ = α 2 ß 2 • Hémoglobine A2.......................................... = α 2 δ 2 • Hémoglobine fœtale F ................................ = α 2 γ 2 La chaîne α est commune à ces trois hémoglobines. La structure spatiale de l’hémoglobine (comme celle de toutes les protéines) dépend de la nature et de la séquence des acides aminés constituant les chaînes. Les liaisons qui se forment entre les différents acides aminés sont responsables de la forme de la molécule, de sa stabilité et de ses propriétés. Placées dans un champ électrique, les hémoglobines se déplacent en fonction de leur charge, de la taille de la molécule, de la force ionique, du pH du tampon et de la nature du support. Les variants de l’hémoglobine sont dus à des mutations de certains acides aminés entraînant des charges de surface différentes et donc des mobilités différentes en électrophorèse. Les anomalies de l’hémoglobine sont de deux sortes : • anomalies qualitatives ou de structure constituant le groupe des hémoglobinopathies ; • anomalies quantitatives ou de régulation constituant le groupe des thalassémies. L’électrophorèse des hémoglobines du sang humain est une analyse très utile en laboratoire d’analyses cliniques pour rechercher les anomalies qualitatives et quantitatives de l’hémoglobine. Parallèlement aux techniques d’électrophorèse sur différents supports, dont le gel d’agarose, la technique d’électrophorèse capillaire s’est développée car elle offre l’avantage d’une automatisation complète de l’analyse, de séparations rapides et d’une bonne résolution. Elle se définit comme une technique de séparation électrocinétique effectuée dans un tube de diamètre interne inférieur à 100 µm rempli d’un tampon composé d’électrolytes. Par de nombreux aspects, elle se présente comme un intermédiaire entre l’électrophorèse classique de zone sur support et la chromatographie liquide. Le système MINICAP utilise le principe de l’électrophorèse capillaire en solution libre, qui représente la forme la plus courante de l’électrophorèse capillaire. Il permet la séparation de molécules chargées en fonction de leur mobilité électrophorétique propre dans un tampon de pH donné, et, selon le pH de l’électrolyte, d’un flux électro-osmotique plus ou moins important. Le système MINICAP comprend 2 capillaires en parallèle, permettant 2 analyses simultanées. Sur ce système, l’injection dans les capillaires de l’échantillon dilué dans la solution hémolysante est effectuée à l’anode par aspiration. La séparation est ensuite réalisée en appliquant une différence de potentiel de plusieurs milliers de volts aux bornes de chaque capillaire. La détection directe des hémoglobines est effectuée à 415 nm côté cathode. Les capillaires sont lavés avant chaque analyse par une solution de lavage, puis par le tampon d’analyse. Avec le tampon utilisé à pH basique, l’ordre de migration des principales hémoglobines normales et anormales est le suivant, de la cathode vers l’anode : δA’2 (variant de A2), C, A2/O-Arab, E, S, D, G-Philadelphia, F, A, Hope, Bart, J, N-Baltimore et H. Il est à noter que l’anhydrase carbonique n’est pas détectée sur le profil électrophorétique des hémoglobines en électrophorèse capillaire, ce qui permet d’identifier certains variants de l’hémoglobine A2 dans sa zone de migration. RÉACTIFS FOURNIS DANS LES KITS MINICAP HEMOGLOBIN(E) * MINICAP HEMOGLOBIN(E) MAXI-KIT POUR DES RÉSULTATS OPTIMUMS : Les éléments d’un même kit doivent être utilisés ensemble et selon les instructions de la notice. LIRE ATTENTIVEMENT LA NOTICE D’UTILISATION. COMPOSANTS RÉF. N° 2207 RÉF. N° 2227* Tampon (prêt à l’emploi) 2 flacons de 250 mL 6 flacons de 250 mL Solution hémolysante (prête à l’emploi) 1 flacon de 225 mL 3 flacons de 225 mL Solution de lavage (solution concentrée) 1 flacon de 25 mL 3 flacons de 25 mL Cupules réactif 1 sachet de 125 3 sachets de 125 Filtres 3 filtres 3 filtres Boîtes pour cupules usagées 4 boîtes 12 boîtes Couvercles pour boîtes cupules usagées 4 couvercles 12 couvercles Étiquettes code-barres solution hémolysante 5 planches de 4 étiquettes 15 planches de 4 étiquettes NOTICE D’UTILISATION SEBIA - Français - 2 - MINICAP HEMOGLOBIN(E) - 2008/07 ATTENTION : Ne pas utiliser d’eau déminéralisée du commerce, eau pour fer à repasser par exemple (risque de détérioration importante des capillaires). Utiliser exclusivement de l’eau de qualité ultrapure, type eau pour préparation injectable. 1. TAMPON Préparation Le tampon est prêt à l’emploi. Il contient : tampon basique, pH 9,4 ; composants sans danger aux concentrations utilisées nécessaires pour des performances optimales. ATTENTION : Voir la fiche de données de sécurité. Utilisation Tampon pour l’analyse des hémoglobines en électrophorèse capillaire. Conservation, stabilité et signes de détérioration Le tampon doit être conservé au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Il est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de tampon. Ne pas stocker le tampon à température ambiante, à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. NE PAS CONGELER. NOTE : Après conservation à 2 – 8 °C, il convient de laisser le tampon atteindre la température ambiante avant de l’utiliser. Un flacon de tampon entamé, installé sur MINICAP, est stable au maximum 1 mois (cumulé) à température ambiante (de 15 à 30 °C). Après chaque utilisation, le tampon doit impérativement être conservé au réfrigérateur à 2 – 8 °C dans les plus brefs délais, il est alors stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur l’étiquette du flacon de tampon. IMPORTANT : Le temps cumulé du tampon passé à température ambiante ne doit pas excéder 1 mois. Éliminer le tampon s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne, d’un précipité ou de particules en suspension. 2. SOLUTION HÉMOLYSANTE Préparation La solution hémolysante est prête à l’emploi. C’est un tampon avec des composants sans danger aux concentrations utilisées, nécessaires pour des performances optimales. Utilisation Pour la dilution et l’hémolyse des globules rouges. Conservation, stabilité et signes de détérioration La solution hémolysante doit être conservée au réfrigérateur (entre 2 et 8 °C). Elle est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution hémolysante. Ne pas stocker la solution hémolysante à température ambiante, à proximité d’une fenêtre ou d’une source de chaleur. NE PAS CONGELER. Éliminer la solution hémolysante s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne, d’un précipité ou de particules en suspension. IMPORTANT : Après chaque utilisation, refermer immédiatement et hermétiquement le flacon de solution hémolysante et le conserver au réfrigérateur. NOTE : La couleur jaune de la solution hémolysante est normale. 3. SOLUTION DE LAVAGE Préparation Le flacon de solution de lavage concentrée doit être complété à 250 mL avec de l’eau distillée ou déminéralisée. ATTENTION : Voir la fiche de données de sécurité. Utilisation Pour le lavage des capillaires après séparation électrophorétique des protéines. IMPORTANT : Avant de remplir le flacon de solution de lavage, il est recommandé de rincer abondamment à l’eau distillée ou déminéralisée le col du flacon, le connecteur et le tuyau afin d’éviter l’accumulation de sels. Conservation, stabilité et signes de détérioration Les solutions de lavage concentrée et diluée doivent être conservées à température ambiante ou au réfrigérateur en flacons fermés pour éviter l’évaporation. La solution concentrée est stable jusqu’à la date d’expiration indiquée sur le kit ou sur l’étiquette du flacon de solution de lavage. La solution diluée est stable pendant 3 mois. Éliminer la solution de lavage diluée s’il y a un changement d’aspect ou apparition d’un trouble dû à une contamination microbienne. 4. uploads/Management/ hb-minicap.pdf