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Rédigé par : Vérifié par : Validé par : Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine Date Signatures 1. OBJECTIFS ET PORTÉE a. Objectif La réalisation du test de l’anticorps HIV permet de déterminer si le système immunitaire d’un patient développe les anticorps spécifiques aux antigènes du virus de l’hépatite b. Personnes concernées Personnel de l’unité des ELISA 2. Domaine d’application Unité des ELISA 3. RÉFÉRENCES Fiche d’utilisation du réactif antigène HIV (HUMAN) 4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS Tâches Personnes autorisées Responsables Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL Validation du test Personnels de l’unité des ELISA et le responsable technique MBEP Christian CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ag HIV Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 5. PRINCIPE Le principe du dosage de l’antigène HIV repose sur l’ELISA sandwich double détection d’antigène et d’anticorps. Des antigènes recombinants spécifiques au VIH 1.2 ainsi que les anticorps monoclonaux dirigé contre l’Ag p24 du VIH sont fixés dans les puits de microtitration ; au cours de l’incubation les anticorps spécifiques et antigènes présent dans l’échantillon se fixent aux antigènes immobilisés ainsi qu’au conjugué 1 formant des complexes doubles antigène-anticorps ; ces complexes sont marqués en ajoutant le conjugué 2 après le cycle de lavage pour l’élimination des composants non fixés, le TMB est ajouté une coloration bleu se forme et vire au jaune à l’ajout du stop . L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration d’Ac-VIH/Ag-VIH dans l’échantillon. 6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée fraichement préparée : 1+24 NB : Ramener les réactifs à température ambiante au moins 30 min avant utilisation MODE OPERATOIRE - Ajouter 30ul du WCON-1 dilué au 10+100 dans les puits du control négatif, positif et échantillon - Ajouter 70ul du CN, CP, et l’échantillon dans les puits ; recouvrir d’un film protecteur adhésif et incuber 60 min à 37 ͦ c - Diluer WCON-2 au 10+100 et ajouter 50ul de la solution diluée dans les puits recouvrir d’un film protecteur adhésif et incuber 30 min à 37 ͦ c - Laver 04 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 400ul de solution par puits) - Diluer le SUBSTRAT au 10+100 et ajouter 100ul de la solution diluée dans les puits recouvrir d’un film protecteur adhésif et incuber 20 min à 18-24 ͦ c à l’abri de la lumière - Ajouter 150ul du Stop - Lire à 450nm de densité optique dans les 3-4 min qui suivent l’ajout du stop. Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale. Le test est valide si : NC ≤ 0.200, CP1 et CP2 ≥ 0.800 Interprétation des résultats qualitatifs Valeur seuil (VS) = moyenne CN + 0 ,400 - Si DO patient < VS → NEGATIVE - Si DO patient > VS → POSITIVE CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ag HIV Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 7. MATERIELS UTILISES Micropipettes Plaque pour les puits Puits pour le test Réactif Gants Embouts Chronomètre Fiche de paillasse Combi Wash Huma Reader  CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ag HIV Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ag HIV Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 ATTESTATION DE LECTURE Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11 uploads/Management/ pos-ag-hiv 1 .pdf