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Cher confrère, BIOFORMA a le plaisir de vous faire parvenir le numéro 5 des Cah

Cher confrère, BIOFORMA a le plaisir de vous faire parvenir le numéro 5 des Cahiers de Formation de Biologie médicale En liaison avec la Direction des Contrôles et des Laboratoires de l'Agence du Médicament, ce cahier fait suite à deux contrôles de qualité nationaux portant sur l'hormonologie et la gazométrie Nous espérons que ce document vous apportera des informations substantielles de mise à jour de vos connaissances dans ces deux domaines et qu'ils vous aideront dans votre pratique quotidienne. Nous vous en souhaitons une bonne réception et vous prions d'agréer, Cher Confrère, nos confraternelles et cordiales salutations. Adrien BEDOSSA Professeur Christian JANOT Président Directeur Division des Laboratoires et des Contrôles. Agence du Médicament. 1 Cahier de Formation Hormonologie – Gazométrie 1996 S O M M A I R E H O R M O N O L O G I E e t M A R Q U E U R S T U M O R A U X EDITORIAL ………………………………………………………………………………………..... 5 LISTE DES AUTEURS …………………………………………………………………………….... 7 IMMUNODOSAGES DES HORMONES STEROIDIENNES R. Cohen, H. Dechaud …………………………………………………………………………...... 9 ANTIGENE CARBOHYDRATE 15-3 (CA 15-3) A. Beaudonnet, R. Cohen ………………………………………………………………………… 35 ANTIGENE CARBOHYDRATE 125 (CA 125) A. Beaudonnet, R. Cohen ………………………………………………………………………… 45 G A Z O M E T R I E PHYSIOLOGIE DE L’EQUILIBRE ACIDE BASE A. Feuillu ……………………………………………………………………………………….….... 57 CAUSES D'ERREURS DANS LA DETERMINATION DE LA GAZOMETRIE SANGUINE A. Feuillu ……………………………………………………………………………………….….... 63 CO-OXYMETRIE ET FORMES USUELLES D’HEMOGLOBINE J.-F. Mollard …………………………………………………………………………………….….. 67 Ceci est la VERSION NUMERIQUE des CAHIERS BIOFORMA déjà parus et distribués à l'ensemble des LABORATOIRES D'ANALYSES de BIOLOGIE MEDICALE en FRANCE. TOUT LE CONTENU DE CE FICHIER RESTE LA PROPRIETE DE BIOFORMA. LES DROITS D'AUTEURS SONT PROTEGES A LA B.N.F. Toute reproduction, toute utilisation, partielle ou totale, des textes, schèmas et photos de cet ouvrage, sans l'autorisation écrite de BIOFORMA, seront poursuivies devant les tribunaux compétents. Seule une impression pour une copie personnelle ( étudiant, interne, biologiste de labm ) est permise. BIOFORMA 230 bd raspail 75014 Paris HORMONOLOGIE et MARQUEURS TUMORAUX 5 Cahier de Formation Hormonologie – Gazométrie 1996 É D I T O R I A L Les pages qui suivent ont été écrites à l'occasion de la douzième opération de Contrôle National en immunoanalyse (décembre 1994). Il s'agissait de la seconde opération de l'année et de la première entièrement organisée par l'Agence du Médicament. Le financement en a été partiellement assuré par Bioforma. Les sujets traités ont été choisis pour compléter ceux abordés dans le Cahier de Formation N° 02 (mai 95) consacré à l'immunoanalyse (hormones, marqueurs tumoraux). Après les problèmes posés par les immunodosages d'hormones glycoprotéiques (hCG, TSH), nous avons voulu analyser les difficultés inhérentes aux dosages de molécules de masse molaire plus faible. Une mise au point sur les immunodosages d'hormones stéroïdiennes nous a paru s'imposer. C'est l'objet du premier chapitre qui comporte des rappels sur les principes des méthodes, les marqueurs, les méthodologies, les indications des dosages et l'interprétation des résultats. Les causes d'erreur et les pièges de ces dosages sont illustrés par les données issues du Contrôle National de Qualité depuis sa mise en place dans le domaine de l'immunoanalyse. Les deux autres chapitres concernent les marqueurs tumoraux. Après avoir évoqué dans le précédent numéro l'antigène carbohydrate 19-9 (CA 19-9) et l'antigène spécifique de la prostate (PSA), nous faisons l'état des connaissances sur un marqueur du cancer du sein, l’antigène carbohydrate 15-3 (CA 15-3) et sur un marqueur du cancer de l'ovaire, l'antigène carbohydrate 125 (CA 125). 7 Cahier de Formation Hormonologie – Gazométrie 1996 L I S T E D E S A U T E U R S Mademoiselle Andrée BEAUDONNET Praticien Hospitalier Laboratoire de Biologie Hôpital de l'Hôtel Dieu - Hôpitaux de Lyon 1, place de l'Hôpital - 69288 LYON CEDEX 02 Monsieur Richard COHEN Maître de Conférences des Universités - Praticien Hospitalier Laboratoire de Biophysique - Faculté de Pharmacie 8, avenue Rockefeller - 69373 LYON CEDEX 08 Service de Radiopharmacie et Radioanalyse - Hôpital Neuro-Cardiologique 59, boulevard Pinel - 69394 LYON CEDEX 03 Monsieur Henri DECHAUD Maître de Conférences des Universités - Praticien Hospitalier Laboratoire de Biophysique - Faculté de Pharmacie 8, avenue Rockefeller - 69373 LYON CEDEX 08 Laboratoire Central de Biochimie - Hôpital de l'Antiquaille 1, rue de l'Antiquaille - 69321 LYON CEDEX 05 9 Cahier de Formation Hormonologie – Gazométrie 1996 IMMUNODOSAGES DES HORMONES STEROIDIENNES R. COHEN, H. DECHAUD I - INTRODUCTION II - PRINCIPES GENERAUX DES IMMUNODOSAGES D'HORMONES STÉROÏDIENNES III - MARQUEURS UTILISES : ASPECTS GENERAUX IV - PRINCIPALES METHODOLOGIES MISES EN ŒUVRE V - PROBLEMES PARTICULIERS LIES AUX IMMUNODOSAGES DES HORMONES STÉROÏDIENNES VI - EXEMPLES D'IMMUNODOSAGES D'HORMONES STÉROÏDIENNES VII - ETAPE PREANALYTIQUE - CONSERVATION DES SPECIMENS VIII - RESULTATS DES ENQUETES INTERLABORATOIRES - ETAT DE L'ART IX - INTERET PHYSIO-PATHOLOGIQUE ET INTERPRETATION DES RESULTATS X - CONCLUSION BIBLIOGRAPHIE 10 Cahier de Formation Hormonologie – Gazométrie 1996 IMMUNODOSAGES DES HORMONES STEROIDIENNES R. COHEN, H. DECHAUD I. INTRODUCTION Avant les années 1965-1970, le dosage plasmatique des hormones stéroïdiennes était impossible à réaliser en pratique courante à cause du manque de sensibilité des méthodes utilisées. . Seuls les dosages de catabolites ou de groupes de catabolites effectués dans les urines permettaient une exploration partielle du métabolisme des hormones correspondantes. Avec le développement des dosages radioimmunologiques, la quasi totalité des hormones stéroïdiennes plasmatiques ont pu être mesurées. Les premiers dosages incluaient des étapes d'extraction et/ou de purification préalables et utilisaient le tritium comme marqueur (1). Des simplifications au niveau méthodologique apparurent ensuite avec le développement des méthodes directes utilisant l'iode 125 comme marqueur et des phases solides. Enfin, l'emploi de marqueurs non radioactifs (enzymes puis luminophores) permit le développement des dosages d'hormones stéroïdiennes dans la plupart des Laboratoires d'Analyses Médicales. . Dans ce chapitre sont abordés successivement les principes de mesure des hormones stéroïdiennes dans le plasma, les marqueurs utilisés avec leurs avantages et leurs inconvénients, les différentes méthodologies mises en œuvre et les problèmes posés par les immunodosages de ces molécules de masse molaire faible (haptènes). Ensuite sont présentés des exemples de dosages d'hormones stéroïdiennes, la nature et les conditions de prélèvement de différents milieux biologiques. Quelques rappels physiopathologiques sur le cortisol, la testostérone, l'estradiol et la progestérone et les principales indications de leur dosage sont abordés. Enfin, le point est fait sur l'état de l'art en 1995 des dosages d'hormones stéroïdiennes à partir des données provenant des programmes externes de contrôle de qualité. II. PRINCIPES GENERAUX DES IMMUNODOSAGES DES HORMONES STÉROÏDIENNES En raison de la faible masse molaire des molécules de stéroïdes, 250 à 350 g.mol-1 pour la plupart d'entre elles, les méthodes les plus utilisées actuellement sont les immunodosages par compétition. Cependant, quelques méthodes de dosage de ces haptènes faisant appel à un excès d'anticorps sont en cours de développement. Elles permettront probablement de réaliser des dosages aussi performants que les dosages d'analytes de masse molaire élevée (supérieure à 5 000 g.mol-1), en termes de rapidité, détectabilité, précision et spécificité. II.1- Méthodes par compétition Deux types de méthodes existent : - Les méthodes par compétition avec antigène (stéroïde) marqué Ce sont les plus couramment utilisées. Dans ces méthodes, il y a compétition entre le stéroïde à doser en quantité variable et le stéroïde marqué en quantité définie, vis à vis d'un nombre limité de sites anticorps en quantité définie. A l'équilibre, la quantification de la réaction immunologique peut se faire de deux manières : a) si le stéroïde marqué libre et le stéroïde marqué lié à l'anticorps délivrent le même signal, une séparation des formes libre (F) et liée (B) du stéroïde est obligatoire. Les méthodes sont alors appelées « méthodes avec séparation de phases ». 11 Cahier de Formation Hormonologie – Gazométrie 1996 Les principales méthodes de séparation sont : • les méthodes au charbon-dextran dans lesquelles il y a adsorption du stéroïde libre sur les particules de charbon- dextran, • les méthodes de précipitation chimique des complexes [anticorps-stéroïde] par le polyéthylèneglycol ou le sulfate d'ammonium, • les méthodes d'immunoprécipitation des complexes [anticorps-stéroïde] avec des immunoglobulines dirigées contre les anticorps des complexes, • les méthodes utilisant des phases solides sur lesquelles sont fixées les anticorps anti-stéroïdes (macro et microbilles, tubes de polypropylène, polystyrène,...) et qui sont, de loin, les plus répandues en raison de leur praticabilité. Après la séparation de phases, la mesure du signal s'effectue alors le plus souvent sur la fraction B, parfois sur la fraction F. b) Si le stéroïde marqué libre et le stéroïde marqué lié à l'anticorps délivrent un signal différent, la mesure du signal peut alors être réalisée sans séparation de phases. Les méthodes sont alors appelées « méthodes en phase homogène ». Les courbes d'étalonnage obtenues sont croissantes lorsque le signal délivré par l'antigène marqué libre est supérieur à celui délivré par le complexe antigène marqué-anticorps ou décroissantes dans le cas contraire. - Les méthodes par compétition avec anticorps marqué Dans ces méthodes, il y a compétition entre le stéroïde en quantité définie, fixé sur une phase solide, et le stéroïde à doser en quantité variable vis à vis d'une quantité définie et en défaut uploads/Management/1996-bioforma-05-hormonologie-gazometrie.pdf