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UNIVERSITE SIDI MOHAMED BEN ABDELLAH FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES – FES D

UNIVERSITE SIDI MOHAMED BEN ABDELLAH FACULTE DES SCIENCES ET TECHNIQUES – FES DEPARTEMENT DES SCIENCES DE LA VIE PROJET DE FIN D’ETUDES Licence en Sciences & Techniques : Sciences Biologiques Appliquées et Santé Présenté par : ZAHI Youssef-Saif Encadré par : Dr. ZIZI Soumia : responsable d'assurance Qualité, de Formation et de Métrologie du CRTS de Fès. Pr. GUISSI Sanae : Professeur à La FST de Fès. Soutenu le : 17/06/2015 Devant le jury composé de : Dr. ZIZI Soumia Pr. GUISSI Sanae Pr. Benchikh Rachid Année Universitaire : 2014-2015 La Qualification Sérologique des Dons du Sang et sa Contribution à la Sécurité Transfusionnelle DEDICACE Je dédie ce mémoire à … A mes chers parents Pour leur soutien, leur patience, leur sacrifice et leur amour. Vous méritez tout éloge, vous, qui avez fait de moi ce que je suis maintenant. J’espère être l’image que vous vous êtes faits de moi, que dieu vous garde et vous bénisse. Je dédie aussi ce travail à mes chers frères, pour leur affection et leurs encouragements qui ont toujours été pour moi des plus précieux. Que ce travail soit pour vous le gage de notre profond amour. A tous mes amis A tous ceux qui m’ont aidés. A tous ceux que j’aime, je dédie ce travail … REMERCIEMENTS Premièrement nous remercions Dieu source de toute connaissance… Au terme de ce travail, j’exprime ma reconnaissance et mes remerciements à toute personne qui m’a été utile pour son accomplissement. Je remercie principalement Dr. ZIZI Soumia, responsable d'assurance Qualité, de Formation et de Métrologie du Centre Régional de Transfusion Sanguine de Fès, d'avoir accepté d’encadrer ce travail. Son choix du sujet, les connaissances qu’elle m’a transmises et le suivi continu des conditions du déroulement de mon stage, m’ont créé l’environnement adéquat pour aboutir à ce résultat. Ce mémoire n’aurait pas pu avoir lieu sans un encadrement de très grande qualité, celui de Pr. GUISSI Sanae, Professeur de biologie moléculaire à la Faculté des Sciences et Techniques de Fès. Je la remercie vivement d’avoir encadré ce sujet, pour son appui et savoir scientifique et sa disponibilité durant la préparation de mon projet de fin d'études. Toute mon estime pour ses aptitudes pédagogiques dont elle a fait preuve, ses remarques constructives et la qualité des discussions qui ont ponctué ce travail. Je la remercie également pour son aide précieuse et continuelle pendant la rédaction de ce mémoire. Je ne manquerai pas l'occasion de remercier chaleureusement : Dr Benyasrhi Abderrahim, directeur du Centre Régional de Transfusion Sanguine de Fès, pour l’opportunité qu’il m’a offert en acceptant mon stage de fin d’étude dans cet intéressant établissement. Qu’il trouve ici l’expression de ma vive gratitude. Mr Lachkar Hassan, Ingénieur d’Etat principal Responsable du laboratoire de Sérologie du CRTS pour son incontestable contribution à l’accomplissement de mon projet, son caractère accueillant qui nous a offert une ambiance très motivante et encourageante au travail, ainsi que pour sa disponibilité extraordinaire qui m’a permis de surmonter les difficultés et autres problèmes rencontrés. Que dieu préserve votre optimisme et votre enthousiasme. Je remercie également Mr BENCHEIKH Rachid, professeur à La Faculté des Sciences et Techniques de Fès de m’avoir fait l'honneur de juger ce travail. Qu’il trouve ici l’expression de ma vive gratitude. Je tiens à remercier I 'ensemble des enseignants de la Faculté des Sciences et Techniques pour leur encadrement tour au long de mes trois années de formation de la licence. Table des matières ABREVIATIONS : ............................................................................................................................ 5 LISTE DES FIGURES ET DES TABLEAUX ............................................................................................ 6 OBJECTIF DE STAGE : ............................................................................................................. 7 INTRODUCTION GENERALE : ......................................................................................................... 8 PRESENTATION DE LIEU DE STAGE .................................................................................... 9 ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE ........................................................................................................... 12 I. Transfusion sanguine ...................................................................................................... 12 1. Définition .................................................................................................................... 12 2. Notion de sang ............................................................................................................ 12  La formation et le renouvellement du sang : ............................................................... 12  Les propriétés physiques du sang : ............................................................................. 13  Les composants du sang : ........................................................................................... 13 II. La Qualification biologique des dons (QBD) ................................................................. 14 1. Définition et Principe .................................................................................................. 14 2. Test de Dépistage ........................................................................................................ 14 3. Examens Immuno-hématologiques ............................................................................. 14 III. L’hépatite B ................................................................................................................. 15 1. Agent étiologique ........................................................................................................ 15 2. Transmission ............................................................................................................... 15 3. Diagnostic ................................................................................................................... 15 IV. L’hépatite C ................................................................................................................. 15 1. Agent étiologique ........................................................................................................ 15 2. Transmission ............................................................................................................... 16 3. Diagnostic ................................................................................................................... 16 V. Le virus de l’immunodéficience humaine (VIH) ............................................................ 17 1. Agent étiologique ........................................................................................................ 17 2. Transmissibilité ........................................................................................................... 18 3. Diagnostic ................................................................................................................... 18 VI. La Syphilis ................................................................................................................. 18 1. Agent étiologique ........................................................................................................ 18 2. Modes de transmission ................................................................................................ 19 3. Diagnostic ................................................................................................................... 19 MATERIEL ET METHODES ............................................................................................................ 20 I. Matériel ........................................................................................................................... 20 1- Matériel biologique ..................................................................................................... 20 2- Le matériel technique .................................................................................................. 21 II. Méthodes ......................................................................................................................... 21 1- ELISA « Enzyme Linked Immunosorbent Assay » .................................................... 22 1. 1 Procédure expérimentale de diagnostic de l’hépatite B .............................................. 23 1. 2 Procédure expérimentale de diagnostic de l’hépatite C .............................................. 26 1. 3 Procédure expérimentale de diagnostic de HIV : ........................................................ 29 2- TPHA « Treponema Pallidum Hemagglutination Assay » ......................................... 33 1. 1 Procédure expérimentale de diagnostic de la Syphilis ................................................ 33 RESULTATS ET DISCUSSION ......................................................................................................... 37 I. Résultats ......................................................................................................................... 37 DISCUSSION ................................................................................................................................ 40 CONCLUSION .............................................................................................................................. 41 REFERENCES ............................................................................................................................... 46 Projet de fin d’études Page 5 ABREVIATIONS :  Ac : Anticorps  Ag : Antigène  BS : Banque de Sang  CNTS : Centre National de Transfusion Sanguine  CRTS : Centre Régional de Transfusion Sanguine  CTS : Centre de Transfusion Sanguine  CGR : Culot Globulaire Rouge  CPS : Concentré Plaquettaire Standard  ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay  TPHA : Treponema Pallidum Hemagglutination Assay  HBs : Hépatite B dans le Sang  IHD : Immuno-Hématologie Donneur  K : Kell  PFC : Plasma Frais Congelé  PSL : Produits Sanguins Labiles  PRP : Plasma Riche en Plaquettes  QBD : Qualification Biologique du Don  RAI : Recherche d’Agglutinines Irrégulières  Rh : Rhésus  SIDA : Syndrome d’Immunodéficience Acquise  SN : Séronégative  SP : Séropositive  SSM : Solution de sag-mannitol  TPHA : Treponema Pallidum Hemagglutination Assay  VHC : Virus de l’hépatite C  VIH : Virus de l’Immunodéficience Humaine (SIDA)  VS : Valeur seuil  TN : Témoin négatif  TP : Témoin positif Projet de fin d’études Page 6 LISTE DES FIGURES ET DES TABLEAUX Figure 1 : Les étapes de parcours de la poche de sang ................................................... 11 Figure 2 : Structure du virus de l’hépatite B .................................................................... 15 Figure 3 : Structure du virus de l’hépatite C .................................................................... 16 Figure 4 : Structure du VIH responsable du SIDA ............................................................ 17 Figure 5 : Schéma de la bactérie Treponema Pallidum .................................................. 19 Figure 6 : Préparation du sérum sanguin ........................................................................ 20 Figure 7 : Appareil d'analyse sérologique (BEP 2000) .................................................... 21 Figure 8 : Principe des différentes variantes du test ELISA ............................................. 22 Figure 9 : Principe de l’ELISA direct ................................................................................. 22 Figure 10 : Comparaison des principes de l’ELISA direct et indirect ............................... 23 Figure 11 : Cupules d’une microplaque ........................................................................... 25 Figure 12 : Plaque représentant les résultats du test HBs-Ag ........................................ 33 Figure 13 : Les réactifs de TPHA ...................................................................................... 34 Figure 14 : Résultats du test TPHA en fonction de l’intensité de la réaction ……………….34 Figure 15 : Taux global de positivité de différents marqueurs de la population étudiée 38 Figure 16 : Taux global de positivité de différents marqueurs selon les régions ........... 39 Figure 17 : Taux de séropositivité par région.................................................................. 39 Tableau 1 : COMPOSITION DE LA TROUSSE Monolisa™ HBs Ag ULTRA ......................... 24 Tableau 2 : COMPOSITION DE LA TROUSSE Monolisa HCV Ag-Ab ULTRA ..................... 27 Tableau 3 : Composition de la trousse Geenscreene HIV Ag-Ab ULTRA ......................... 30 Tableau 4 : Résultats des tests sérologiques de la population étudiée entre janvier et Mai 2015 ......................................................................................................................... 37 Tableau 5 : Séropositivité exprimée en nombre et en pourcentage de la population par région .............................................................................................................................. 39 Projet de fin d’études Page 7 OBJECTIF DE STAGE : Le contexte de ce travail s’inscrit dans un cadre pratique qui consiste à assurer la sécurité transfusionnelle. Il a pour objectifs : Le dépistage viral de l'hépatite B, l’hépatite C et le HIV par l'utilisation de la technique «ELISA» 3ème génération (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay). Le dépistage bactérien de la syphilis par l'utilisation de « TPHA » (Treponema Pallidum Haemagglutination Assay). Projet de fin d’études Page 8 INTRODUCTION GENERALE : La transfusion sanguine est une thérapie vitale se basant sur l’injection intraveineuse de sang ou ses dérivés (globules rouges, plaquettes, plasma) provenant d’un donneur à un receveur. Le nom de transfusion sanguine englobe la collecte, la préparation et l’utilisation du sang ou ses dérivés (6). Les indications médicales de la transfusion consistent essentiellement dans le traitement des anémies, qui proviennent soit d’un défaut de production des globules rouges (aplasies médullaires, anémies des leucémies aigues), soit d’un excès de destruction des globules rouges (anémies par hémolyse), soit encore d’une tendance hémorragique constitutionnelle ou acquise (hémophilie, purpura thrombopénique, choc traumatique, hémorragie au cours d’interventions chirurgicales uploads/Philosophie/la-qualification-serologique-d-zahi-youssef-saif-2809.pdf