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La technique Principes de la technique C’est le recueil de fragments tissulaire

La technique Principes de la technique C’est le recueil de fragments tissulaires qui sont découpés pour permettre la réalisation de fines tranches colorées à l’HES pour analyse morphologique au microscope optique. L’analyse morphologique est l’étude de l’architecture des tissus, des contours des cellules, des noyaux pour permettre un diagnostic. La fixation Fixation A l’air libre tout prélèvement tissulaire s’autodégrade spontanément (putréfaction). Certaines molécules possèdent la propriété de créer des ponts chimiques empêchant cette dégradation. Ces molécules sont des fixateurs. Il est indispensable de fixer un prélèvement avant analyse histologique afin de permettre son analyse morphologique. On recommande un volume de fixateur égal à 5 fois le volume du prélèvement Les fixateurs FORMOL TAMPONNE Principal fixateur, validé au niveau international, classé toxique (risque cancérigène) de bonne qualité pour les études de biologie moléculaire FORMOL ACETIQUE Exclusivement réservé aux biopsies prostates et biopsies rénales inflammatoires. Il préserve mieux les détails cellulaires mais empêche certaines techniques de biologie moléculaire Les prélèvements Biopsies Tout prélèvement partiel d’un organe ou d’une lésion Exérèse / pièce opératoire Exérèse complète d’une lésion, d’un organe ou d’un segment d’organe. Prélèvement REALISER LE PRELEVEMENT Suivant les recommandations CONDITIONNER LE PRELEVEMENT (le fixer) • choisir le fixateur • choisir le pot / flacon en fonction de la taille du prélèvement • mettre le prélèvement dans le pot et fermer hermétiquement IDENTIFIER LE MATERIEL • identifier les flacons • identifier le bordereau de demande COMPLETER LE BORDEREAU • compléter l’identité du patient • compléter les conditions de réalisation du prélèvement • compléter les destinataires du compte rendu • compléter les renseignements cliniques • signaler une urgence ou une anomalie TRANSMETTRE LE MATERIEL • mettre dans un sachet de transport • déposer le prélèvement dans le site convenu • remplir le cahier de traçabilité si présent (partie dépôt) • matériel conservé à température ambiante +/- demande spécifique de passage du coursier RECUPERER LE MATERIEL / TRANSPORT • Coursier du laboratoire • compléter le cahier de traçabilité si présent (partie retrait) • Respect des conditions règlementaires de transport Etapes de la technique Réalisation du prélèvement Suivant les recommadations Préleveur Conditonnement = mise dans un fixateur pour éviter la putréfaction Préleveur Panseuse Transport En respectant les règles d’hygiène Coursier Réception enregistrement Attribution d’un numéro spécifique au laboratoire Secrétaire habilitée Prise en charge macroscopie Coupe du matériel en tranches de 3 à 4 mm Macroscopiste Déshydratation L’eau intra et extra cellulaire est enlevée Automate Inclusion Le prélèvement est enrobé dans la paraffine Technicien Coupe et étalement sur lame Le bloc est coupé en fines tranches de 3 à 4 m Technicien Coloration des lames Coloration HES (hématéine / Eosine / Safran) Automate Lecture au microscope Etude morphologique (forme cellules et noyaux) Pathologiste Rédaction du compte-rendu Au prescripteur et correspondants Pathologiste Archivage des blocs et lames Lames / blocs archivés pour durée légale 10 ans Secrétaire Colorations spéciales Indications En fonction des résultats de la coloration HES et des renseignemetns cliniques des colorations spéciales peuvent être demandées sur le bloc. Principales colorations disponibles Coloration par le PAS • Mise en évidence de filaments mycéliens • Etude de la lame basale Coloration par le Giemsa • Recherche de bactéries • Métachromasie des PN éosinophiles et des mastocytes Coloration par le trichrome • Etude de la fibrose • Recherche de thrombi Coloration Perls • Recherche de dépôts hémosidériniques Coloration de Ziehl • Recherche de BAAR • Mise en évidence de parasites Coloration Rouge Congo • Recherche d’amylose Coloration de Grocott • Recherche d’agents pathogènes Coloration de la réticuline • Etude de la trame de réticuline Technique immunohistochimie Principes A partir d’une coupe du bloc de paraffine, on recherche la présence d’un fragments de protéine (antigène). La fixation d’un anticorps spécifique (clone) de l’antigène est soulignée par une réaction colorimétrique (marron ou rouge) . Cette technique complémentaire peut être réalisée dans le laboratoire en 4 heures après analyse histologique standard. Technique biologie moléculaire Principes A partir d’un bloc de paraffine ou d’un tube de tumorothèque, il est possible de réaliser une étude de biologie moléculaire. Les données de biologie moléculaire participent de plus en plus au diagnostic. Ces analyses sont sous traitées au CHU du Haut Lévêque ou à l’Institut Bergonié Les techniques Les techniques - l’amplification d’un segment spécifique par technique PCR pour l’ADN puis le séquençage,l’électrophorèse… - la technique d’hybridation in situ, qui met en évidence une séquence spécifique d’ADN ou d’ARN. La fixation de la sonde est révélée par un chromogène (CISH) ou un fluorochrome (FISH). Plaquette d’information Réf : M-CO-FI-9 La technique standard HISTOLOGIE Laboratoire CAP 30 bis rue Ulysse Gayon - 33000 Bordeaux Tél : 05.57.81.23.10 - Fax : 05.57.81.23.11 e-mail : secretariat-cap@orange.fr uploads/Science et Technologie/ m-co-fi-9-plaquette-technique-standard-histologie-pdf.pdf