Remerciez-le!

Remerciez @Admin pour avoir partagé cet document gratuitement, de la manière la plus simple, en partageant sur les réseaux sociaux.

Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai

Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai 2008 1 Organise En Collaboration avec le Bureau de Liaison de l’OMS à Alger NEUVIEME COURS NATIONAL D’HYGIENE ET DE MICROBIOLOGIE DES ALIMENTS UNITE : « MICROBIOLOGIE DES EAUX ET DES BOISSONS » du 03 au 14 Juin 2006 MANUEL DE TRAVAUX PRATIQUES DES EAUX Responsable des Travaux Pratiques : Dr LEBRES – IPA Assistants : Mr Azizi Djamal Mr Boudjellab Badreddine Mr Toaouchichet Belkacem Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai 2008 2 SOMMAIRE Analyse des Eaux Intitulé Codification Version Date Recherche et Dénombrement des Microorganismes revivifiables. Méthode par comptage des colonies obtenues à 30°C, dans les eaux de forage. MO.MR.EA 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement des Microorganismes revivifiables. Méthode par comptage des colonies obtenues à 22 et à 37°C, dans les eaux minérales embouteillées. MO.MR.EM 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement des Coliformes, Coliformes thermo tolérants et Escherichia coli dans les eaux par filtration. MO.CTT.MS 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement des Coliformes, Coliformes thermo tolérants et Escherichia coli dans les eaux en milieu liquide. MO.CTT.ML 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement des Entérocoques intestinaux et Streptocoques fécaux dans les eaux par filtration. MO.ST.MS 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement des Entérocoques intestinaux et Streptocoques fécaux dans les eaux en milieu liquide. MO.ST.ML 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement de Staphylocoques à coagulase positive dans les eaux. MO.SA.MS 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement de Pseudomonas aeruginosa par filtration dans les eaux. MO.PA.MS 00 02 / 1 / 06 Recherche et Dénombrement des Anaérobies Sulfito-Réducteurs par filtration par comptage des colonies à 44°C dans les eaux MO.ASR.MS 00 02 / 1 / 06 Recherche des Salmonella dans les eaux par filtration. MO.SL.MS 00 02 / 1 / 06 Recherche de Vibrion cholérique dans les eaux. MO.VC.MS 00 02 / 1 / 06 Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai 2008 3 LE PRELEVEMENT AU ROBINET  ASEPTIE MAXIMUM  FLAMBAGE - DESINFECTION  EVACUATION DES PREMIERS LITRES  DEBIT DE REMPLISSAGE  VOLUME A PRELEVER PUITS ET FORAGES  CONNAITRE LA NAPPE  CONNAITRE L'USAGE DE CES EAUX LE TRANSPORT TEMPERATURE  MULTIPLICATION  MORTALITE  TEMPERATURE DE 4°C DELAIS  LES PLUS COURTS POSSIBLES EAUX EMBOUTEILLES  LE DENOMBREMENT DOIT AVOIR LIEU DANS LES HEURES QUI SUIVENT L'EMBOUTEILLAGE LES FLACONS NATURE  VERRE  FLACONS A USAGE UNIQUE STERILISATION  PAR LA CHALEUR  PAR L'OXYDE D'ETHYLENE  PAR LES RAYONS GAMMA  CONTROLE DE STERILITE  STERILISATION EXTERIEURE NEUTRALISANTS  THIOSULFATE DE SODIUM (Pastilles)  EDTA Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai 2008 4 LOGO Mode opératoire / Enregistrement Code : MO.MR.EM Version : 00 Date : 02/ 01 / 06 Page : 1 / 3 Recherche et dénombrement des Microorganismes revivifiables à 22 et à 37°C dans les eaux minérales embouteillées. Sommaire : 1. Objet et domaine d’application. 2. Définition. 3. Référentiels. 4. Mode opératoire. 5. Lecture et interprétation. 1. Objet et domaine d’application. Cette méthode consiste en la recherche et le dénombrement des microorganismes dans les eaux minérales embouteillées destinés à la consommation humaine par comptage des colonies à 22° et à 30°C. 2. Définition. Dans le sens de cette méthode, on entend par microorganismes : Bactéries, Levures, Moisissures se développant en aérobiose, lorsque l’essai est effectué selon la méthode spécifiée. 3. Référentiels.  Norme NF EN ISO 6222 : Dénombrement des micro organismes revivifiables : comptage des colonies par ensemencement dans un milieu de culture nutritif gélosé.  Norme NF V 08-010 : Règles générales pour la préparation des dilutions en vue de l’examen microbiologique.  Norme NF EN ISO 6887-1 : Suspension mère et dilutions décimales ; 1. règles générales.  Norme NF V 08-057-2 : Microbiologie alimentaire – Directives générales pour la préparation des dilutions en vue de l’examen microbiologique.  Norme XP V 08-102 : Règles générales pour le comptage des colonies et l’expression des résultats.  Norme NF ISO 7218 : Règles générales pour les examens microbiologiques.  Norme NF ISO 17025 relative aux prescriptions générales concernant la compétence des laboratoires d’étalonnage et d’essais. 4. Mode Opératoire. A partir de l’eau à analyser (SM = 1) et/ou des dilutions décimales 10-1 et 10-2, porter aseptiquement 1 ml en double dans deux boites de Pétri vides, numérotées et préparées à cet usage comme l’indique le schéma n°2 ci-après. Compléter ensuite avec environ 19 ml de gélose TGEA fondue puis refroidie à 45 ± 2°C. Le temps qui s’écoule entre le moment où l’on a distribué l’inoculum dans la boite et celui où le milieu est coulé ne doit pas excéder 15 minutes. Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai 2008 5 Faire ensuite des mouvements circulaires et de va-et-vient en forme de « 8 » pour permettre à l’inoculum de se mélanger à la gélose, sur une surface fraîche et horizontale. Laisser solidifier les boites sur paillasse, puis rajouter une deuxième couche d’environ 5 ml de la même gélose ou de gélose blanche. Cette double couche, a un rôle protecteur contre les contaminations externes diverses. Les boites seront partagées en deux séries distinctes :  La première série sera incubée à 22 ± 2°C pendant 68 ± 4 heures,  La seconde série sera incubée à 36 ± 2°C, pendant 44 ± 4°C heures. 5. Lecture et interprétation. Les colonies de microorganismes revivifiables apparaissent en masse sous formes lenticulaires et bien distinctes. Retenir les boites contenant moins de 300 colonies, au niveau de deux dilutions successives. Il faut qu’une boite renferme au moins 15 colonies. Calculer ensuite la valeur du nombre N, de microorganismes revivifiables à 22 ± 2°C à part et celle du nombre N de microorganismes revivifiables à 36 ± 2°C à part, en tant que moyenne pondérée, à l’aide de l’équation suivante : Σ c N = 1,1 x d où : Σ c : est la somme des colonies dénombrées sur deux boites de dilutions successives retenues. d : est le taux de dilution correspondant à la première dilution. Arrondir les résultats calculés à deux chiffres significatifs après la virgule. Le résultat final de microorganismes revivifiables dénombrés à 22°C et à 37°C par ml d’eau est noté par un nombre compris entre 1,0 et 9,9 multiplié par 10x où x est la puissance appropriée de 10. Exemple : Un dénombrement de microorganismes à 37°C a donné les résultats suivants :  à la première dilution retenue 10-2 : on a 158 colonies.  à la seconde dilution retenue 10-3 : on a 14 colonies. Σ c 158 + 14 172 N = = = = 15636 1,1 x d 1,1 x 10-2 0,011 Arrondir à deux chiffres significatifs, soit 16000 ou mieux encore : 1,6 x 104 microorganismes par ml d’eau à 22°C ou à 37°C Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai 2008 6 LOGO Mode opératoire / Enregistrement Code : MO.MR.EM Version : 00 Date : 02/ 01 / 06 Page : 1 / 3 Recherche et dénombrement des Microorganismes revivifiables à 22 et à 37°C dans les eaux minérales embouteillées. 1 ml 1ml Eau à Analyser 10-1 10-2 1 ml 1 ml 1 ml Ajouter environ 19 ml de gélose TGEA Laisser solidifier sur paillasse puis incuber à : 22 ± 2°C, 68 ± 4 heures 1 ml 1 ml 1 ml Ajouter environ 19 ml de gélose TGEA Laisser solidifier sur paillasse puis incuber à : 36 ± 2°C, 44 ± 4 heures Dénombrer les colonies lenticulaires ayant poussé en masse dans chacune des boites, puis calculer la valeur de N à 22°C puis celle de N à 36°C. Obligatoire Facultatif Cours d’Hygiène et de Microbiologie des Eaux – Institut Pasteur d’Algérie – Mai 2008 7 LOGO Mode opératoire / Enregistrement Code : MO.CTT.MS Version : 00 Date : 02/ 01 / 06 Page : 1 / 3 Recherche et dénombrement des Escherichia coli et des bactéries Coliformes. Méthode par filtration. Sommaire : 1. Objet et domaine d’application. 2. Définitions. 3. Référentiels. 4. Mode opératoire. 5. Lecture et interprétation. 1. Objet et domaine d’application. Il s’agit là d’une méthode de référence qui consiste en la recherche et le dénombrement des Escherichia coli et des bactéries Coliformes éventuellement présents dans les eaux destinées à la consommation humaine, par comptage des colonies obtenues en milieu solide après 24 à 48 heures d’incubation en aérobiose à 36 ± 2°C puis à 42 ± 2°C. La présente méthode est recommandée pour les eaux peu contaminées. 2. Définitions. Au sens de cette méthode, on entend par Coliformes des bacilles à Gram négatifs, aérobies ou anaérobies facultatifs, non sporulés, ne possédant pas d’oxydase, capables de se multiplier en présence de sels biliaires et capables de fermenter le lactose avec production d’acide et uploads/Science et Technologie/ maq-eaux-08.pdf