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TP DE BIOLOGIE CLINIQUE I. NUMÉRATION DES GLOBULES BLANCS 1. Globules blancs a.

TP DE BIOLOGIE CLINIQUE I. NUMÉRATION DES GLOBULES BLANCS 1. Globules blancs a. Étymologie et définition Les globules blancs, également appelés leucocytes ( du grec leukos : blanc et kutos : cellule ), correspondent à des cellules du système immunitaire. Leur nom provient de la centrifugation d'échantillons de sang, où la couche rouge correspond aux érythrocytes, la couche transparente au plasma, et la couche intermédiaire blanche aux leucocytes. Il en existe plusieurs types, les granulocytes (ou polynucléaires), les lymphocytes et les monocytes. Chaque type joue un rôle important au sein du système immunitaire en participant à la protection contre les agressions d'organismes extérieurs de manière coordonnée. b. Source Fabriqués dans la moelle osseuse, à partir des cellules souches hématopoïètiques dont il existe deux lignées, myéloïde et lymphoïde; les globules blancs sont présents dans le sang, la lymphe, les organes lymphoïdes et dans de nombreux tissus conjonctifs. c. Rôle Les leucocytes constituent un maillon important dans la protection contre les infections. En effet, en agissant de manière séquentielle, ils permettent l'élimination de nombreux agents étrangers parmi les virus, les bactéries, les champignons et les parasites. 2. Numération des globules blancs a. Définition La numération des globules blancs représente le total du nombre de tous les leucocytes. b. Importance La numération des globules blancs fait partie de la numération formule sanguine (NFS). La variation de leur nombre peut orienter vers une infection, inflammation ou un dysfonctionnement de la moelle osseuse; d'où, doser leur taux s'avère très utile. Cette numération sert aussi à surveiller la réaction de l'organisme à différents traitements. c. Principe Il n’est pas indispensable d’être à jeun pour le prélèvement. La piqûre se fait au bout du doigt ou par ponction veineuse de sang recueilli sur EDTA disodique (2 gouttes d’une solution à 5% pour 5 ml de sang). Le sang est dilué à l’aide de la solution de Türk, un diluant leucocytaire qui lyse les globules rouges et laisse intacts les globules blancs. On compte alors les leucocytes, au microscope, sur une cellule de comptage et on calcule le nombre de leucocytes par mm3 ou par litre de sang. Valeurs de référence Au total, le taux de leucocytes doit normalement être compris entre 4 000 et 10 000 par mm3 (ou ml) de sang chez l’homme et la femme adultes. Durant la grossesse, il peut dépasser les 10 000. Variations et interprétation Un nombre élevé de globules blancs est appelé leucocytose. Cela peut être en rapport avec une infection notamment bactérienne, une inflammation, une leucémie, des traumatismes, des médicaments ou le stress. Un nombre de globules blancs diminué est appelée leucopénie. Cela peut résulter d’une moelle osseuse endommagée, des médicaments, une carence en vitamines, tels que l'acide folique (vitamine B9) soit la vitamine B12,... II. FORMULE LEUCOCYTAIRE a. Définition La formule leucocytaire est le dénombrement de différentes populations de leucocytes ou globules blancs afin d'indiquer la proportion de chacun dans un échantillon sanguin. Les variations de l'un ou l'autre dépendra de plusieurs facteurs. b. Types de leucocytes Ces différentes populations de leucocytes sont : Les polynucléaires ou granulocytes : On les appelle polynucléaires en raison d'une erreur historique : de par le caractère plurilobé de leur noyau (de deux à cinq lobes en général), on a longtemps cru que ces cellules possédaient plusieurs noyaux. Les mononucléés sont appelés ainsi car possédant un noyau non segmenté. Le qualificatif de « neutrophile » vient d'une caractéristique visible en microscopie Polynucléaires Neutrophile avec une valeur normale de 1500 à 7500/mm3, soit 40 à 60% optique : après ajout des colorants vitaux usuels (May-Grünwald Giemsa ou MGG), ces cellules restent neutres (elles fixent mal les colorants acides et basiques). Surtout impliqué dans la défense de l'organisme contre les bactéries. Éosinophile avec une valeur normale de 100 à 500/mm3, soit 1-4% Le qualificatif d'« éosinophile » vient du fait, qu'en microscopie optique, après ajout des colorants vitaux usuels, ces inclusions cytoplasmiques fixent l'éosine (elles sont acidophiles) colorant la cellule en rouge. Surtout impliqué dans la défense de l'organisme contre les parasites. Basophile avec une valeur normale de 0 à 150/mm3, soit 0-1% Le qualificatif de « basophile » vient d'une caractéristique visible en microscopie optique : après ajout des colorants vitaux usuels, ces cellules se colorent en bleu (leurs grandes inclusions cytoplasmiques fixent les colorants bleus). Ils activent la réaction inflammatoire et interviennent dans les réactions allergiques, en libérant l'histamine, ce qui occasionne les symptômes habituels des allergies. Mononucléées Monocytes avec une valeur normale de 200 à 1000/mm3, soit 2 à 10% Ils appartiennent à la famille des phagocytes mononuclées, présents dans le sang qui évoluent, en passant dans les tissus biologiques, en macrophages et cellules dendritiques. Ils sont impliqués dans le défense de l'organisme contre les virus, bactéries, parasites,... Lymphocyte avec une valeur normale de 1500 à 4000/mm3, soit 20 à 40% Au microscope, les lymphocytes apparaissent comme des cellules ovoïdes, nucléées, dont le noyau de grande taille occupe quasiment tout le corps cellulaire. Ils sont impliqués dans la défense de l'organisme contre différentes agressions. c. Importance de la formule leucocytaire La formule leucocytaire fait normalement partie intégrante de l’hémogramme, examen biologique utilisé pour le dépistage , l'exploration et le suivi de la plupart d'hémopaties. Elle évalue la capacité de l’organisme à répondre à une infection et à la combattre. Elle aide aussi à répartir les différents globules blancs afin de diagnostiquer une maladie affectant le système immunitaire. III. INTERPRÉTATION DE LA FORMULE LEUCOCYTAIRE Le taux peut être compris entre les valeurs de référence, soit être varié suite à une modalité quelconque Polynucléaires ou granulocytes Neutrophiles Polynucléose neutrophile ( > 7500/mm3) Peut être dûe à une infection (la plupart des infections bactériennes), maladie inflammatoire,... Neutropenie ( < 2000/mm3) Possible après certaines infections virales, lors de la prise de certains médicaments, dans certaines maladies de la moelle,.. Éosinophile Hyperéosinophilie ou polynucléose éosinophile (> 500/mm3) Dû à de nombreux parasites , en particulier ceux qui envahissent les tissus, provoquent une éosinophilie. Hypoéosinophilie ( < 100/mm3) Dûe à la prise d’un traitement par corticoïdes, un stress aigu,... Polynucléose basophile ( >150/mm3) Due soit à une réaction allergique , soit à certaines formes assez rares de leucémie. Basophile Basocytopénie ( <5/mm3) N'a pas vraiment de valeur diagnostic mais peut être observée au cours d'un stress aigu, de la prise de certains médicaments, d'un choc allergique ou anaphylactique. Mononucléaires Monocyte Monocytose ( >1500/mm3) associée à des infections, à la phase de récupération consécutive à une neutropénie, et à des affections inflammatoires, mais également à des pathologies du système hématologique. Monocytopénie ( < 100/mm3) peut être liée à une infection du sang, une chimiothérapie, un trouble de la moelle osseuse. Lymphocyte Lymphocytose ( > 4000/mm3) signe d'une atteinte infectieuse, le plus souvent virale. Lymphocytopénie ( < 1500/mm3 ) Peut être dû aux infections virales et la malnutrition. IV. NUMÉRATION DES RÉTICULOCYTES 1. Réticulocytes a. Étymologie et définition Appelés ainsi car ce sont des cellules reticulaires. Les réticulocytes sont les précurseurs des globules rouges, sont donc des jeunes globules rouges immatures. Leur développement jusqu’au stade de globule rouge dure trois jours dans la moelle osseuse et une journée dans la circulation sanguine. Leur présence dans le sang périphérique témoigne de l’activité de l’érythropoïèse, soit la production de globules rouges. b. Source Les réticulocytes sont produits dans la moelle osseuse, font partie de la lignée myéloïde de l'hématopoïèse. 2. Numération des réticulocytes a. Définition La numération des réticulocytes est le dénombrement du nombre total des réticulocytes dans le sang. b. Indications et importance La numération réticulocytaire est utilisée pour le diagnostic des anémies, mais aussi pour l’évaluation de la réponse aux traitements des patients aplasiques (dont la moelle osseuse fonctionne peu ou plus) ou ayant subi une greffe de moelle osseuse. Cette analyse peut aussi être utile dans d’autres situations, par exemple en cas de traitements toxiques pour la moelle osseuse, ou pour rechercher la présence d’hémorragies « cachées ». c. Procédure ou Principe 1. Comptage manuel Le dosage des réticulocytes se base sur un prélèvement de sang veineux (en général au pli du coude) après la pose d’un garrot qui sera rapidement enlevé pour ne pas fausser les résultats. Le tube de sang contient un anticoagulant. L’échantillon n’a pas besoin d’une grande quantité de sang. IL peut être effectué sur quelques gouttes de sang chez l’enfant. Elle peut se faire « manuellement » au microscope sur un frottis du sang, après avoir coloré les cellules au bleu de méthylène. Ici, le comptage de faut par champ microscopique. 2. Comptage automatique Pour compter avec précision le nombre de réticulocytes, les automates utilisent les marqueurs fluorescents liés à l'ARN. Ce comptage peut évaluer jusqu'à 30.000 globules rouges ; comparablement au comptage manuel, les résultats du comptage automatisé sont disponibles plus rapidement, soit en moins d'une minute. Cette chronologie de fluorescence permet de classifier les réticulocytes en 3 catégories selon leur maturation : LFR : réticulocytes matures MFR : réticulocytes semi matures HFR : réticulocytes immatures d. Valeurs de référence À titre indicatif, la valeur normale en pourcentage est comprise entre 0,4 et uploads/Sante/ expose-de-biologie-clinique.pdf