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PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 0

PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 06/05/2021 Page 1 sur 7 Nom et prénom Fonction Date Signature Rédaction SOUBEIGA/YIRGA Chantal Technologiste biomédical 03/05/2021 Vérification ZANHO A. Abdoul Kadré RQ/SLAB 04/05/2021 Approbation Pr Idrissa SANOU Chef /SLAB 05/05/2021 Localisation : PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 06/05/2021 Page 2 sur 7 SOMMAIRE 1. BUT ..................................................................................................................................... 3 2. CHAMP D’APPLICATION ............................................................................................... 3 3. TERMINOLOGIE .............................................................................................................. 3 4. RESPONSABILITES ......................................................................................................... 3 5. MISE EN ŒUVRE ............................................................................................................. 3 5.1. DEFINITION ................................................................................................................... 3 5.2. INDICATIONS................................................................................................................. 3 5.3. CONTRE-INDICATIONS .................................................................................................. 3 5.4. MATERIEL .................................................................................................................... 4 5.5. CONDITIONS ................................................................................................................. 4 5.6. TECHNIQUE ................................................................................................................... 4 5.6.1. MISE EN CULTURE ..................................................................................................... 4 5.6.2. LECTURE DES BOITES DE PETRI ................................................................................. 5 5.6.3. ANTIBIOGRAMME ...................................................................................................... 5 5.7. COMPTE RENDU DES RESULTATS ................................................................................... 5 5.8. PRECAUTIONS ET SURVEILLANCE .................................................................................. 6 6. PROCEDURES RATTACHEES........................................................................................ 6 7. REFERENCES ................................................................................................................... 6 8. ANNEXES .......................................................................................................................... 6 8.1. DOCUMENTS ANNEXES ............................................................................................ 6 8.2. HISTORIQUE DES VERSIONS .................................................................................... 6 9. ATTESTATION DE LECTURE ET DE COMPREHENSION ......................................... 7 PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 06/05/2021 Page 3 sur 7 1. BUT La présente procédure a pour but de : - Identifier les bactéries responsables d’une septicémie, - étudier la sensibilité des bactéries identifiées aux antibiotiques 2. CHAMP D’APPLICATION Cette procédure s’applique à tout le personnel intervenant dans la section de bactériologie au laboratoire de biologie médicale du CHU-T. 3. TERMINOLOGIE - CHU-T : Centre Hospitalier Universitaire de Tengandogo - RQ : Responsable Qualité - SLAB : Service du Laboratoire d’Analyses de Biologie Médicale - SMQ : Système de Management de la Qualité 4. RESPONSABILITES Le chef de service du laboratoire d’analyses biomédicales du CHU-T et son personnel sont responsables de la mise en œuvre de cette procédure. Le chef de service est chargé de la formation du personnel de laboratoire sur la procédure. 5. MISE EN ŒUVRE 5.1. Définition Sang : liquide visqueux qui coule dans les vaisseaux sanguins Septicémie : infection généralisée de l’organisme associée à une réponse inflammatoire grave. 5.2. Indications - Fièvre à répétition - Enquêtes et études 5.3. Contre-indications - Antibiothérapie en cours PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 06/05/2021 Page 4 sur 7 5.4. Matériel - Gros matériel : microscope optique, Hotte à Flux laminaire, Etuve, Autoclave, automate d’hémoculture, centrifugeuse, etc. - Petit Matériel : cellule de comptage, Bec BUNSEN, etc. - Réactifs et consommables : milieux de culture, lame porte objet, lamelles, anse calibrée à 10 μL, bouillon d’hémoculture, colorant de Gram, galerie d’identification, pipettes pasteur en verre, huile à immersion, tubes à hémolyse, tubes à essai, écouvillons, pipettes plastiques stériles, etc 5.5. Conditions Prélever le sang au pic de la fièvre, température supérieure à 39˚C. 5.6. Technique 5.6.1. Mise en culture  Le bactec  Incuber les flacons de culture dans le bactec en procédant comme suit. - Appuyer sur la touche « rotation à l’origine » de bactec, - ouvrir la porte de l’instrument, - Appuyer sur la touche en dessous de l’icône du tube de chargement - Scanner le code-barre du flacon d’hémoculture - Insérer l’hémoculture dans la station identifiée - Confirmer la fin de l’opération de chargement - Répéter pour chaque tube qui doit être chargé.  Retirer les cultures positives (alarme du bactec) faire une subculture dans des milieux appropriés et colorer au Gram, retirer des cultures négatives après 5 jours d’incubation, faire une subculture. Procéder comme suit - Appuyer sur la touche « rotation à l’origine » de l’instrument - Ouvrir la porte de l’instrument - Appuyer sur la touche (identifiée par l’icône de l’image) pour sortir les flacons - Scanner le code-barre du flacon - Répéter pour sortir tous les autres flacons  Subculture PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 06/05/2021 Page 5 sur 7 - désinfecter le bouchon du flacon d’hémoculture avec un tampon d’alcool ou de povidone – iode, - prélever approximativement 1mL de sang du flacon en utilisant une seringue aseptique et le mettre dans un tube à hémolyse, - ensemencer les différents milieux en quadrant, - pour les flacons aérobies, anaérobies et pédiatriques, ensemencer sur gélose de sang ou Gélose chocolat, incuber dans 5% de CO2 à 37°C et gélose MacConkey ou EMB à 37°C entre 18-24h, - faire des frottis pour la coloration de Gram, suivant les résultats de la coloration de Gram, ajouter des boîtes de géloses spécifiques. 5.6.2. Lecture des boîtes de Pétri - Examiner toutes les boîtes pour rechercher la preuve macroscopique d’une croissance bactérienne après 24 heures d’incubation. - Si aucune croissance n’est observée sur les milieux de culture, les réincuber, les examiner et ne les considérer négatifs qu’après 48 heures. - Procéder à l’étude des caractères morphologiques, culturaux biochimiques et antigéniques des bactéries isolées en se référant aux annexes portant sur l’identification des différentes espèces bactériennes. Pour toute culture positive réaliser un test de sensibilité aux antibiotiques 5.6.3. Antibiogramme - L’antibiogramme est systématique une fois qu’un germe en cause de l’infection est isolé. - Repiquer sur GO ou sur GC pour les Streptocoques, incuber pendant 18h à 48h. - Après incubation procéder à l’antibiogramme selon la méthode de Kirby Bauer. Son principe est basé sur la diffusion des disques d’antibiotiques sur milieu gélosé MH. 5.7. Compte rendu des résultats Voir fiche de résultat d’hémoculture. PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 06/05/2021 Page 6 sur 7 5.8. Précautions et surveillance Voir procédure générale de bactériologie. 6. PROCEDURES RATTACHEES Néant 7. REFERENCES - BIOMED- UNIBIO Manuel de prélèvement 1-C2DOCAQ07- Version 6.0 - RESAOLAB N˚AFD CZZ 1338 8. ANNEXES 8.1. Documents annexes 8.2. Historique des versions Date de révision Version Description des modifications Effectué par / signature PROCEDURE D’HEMOCULTURE Réf : LAB/BAC/PR-01 VERSION : 01 DATE D’APPLICATION : 06/05/2021 Page 7 sur 7 9. Attestation de lecture et de compréhension Nom et prénom(s) Date Signature uploads/Societe et culture/ 01-procedure-d-x27-hemoculture.pdf