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Tp num 4 systematique But de TP La classi ?cation phénétique de nos bactéries isolées Introduction La science des règles de la classi ?cation s ? appelle taxinomie La taxinomie permet de nommer les organismes vivants la nomenclature et de les classer en u

But de TP La classi ?cation phénétique de nos bactéries isolées Introduction La science des règles de la classi ?cation s ? appelle taxinomie La taxinomie permet de nommer les organismes vivants la nomenclature et de les classer en unités taxons au sein desquels ils partagent un grand nombre de caractéristiques communes En microbiologie cela nous permet d ? identi ?er l ? identi ?cation les microorganismes pour mieux les utiliser ou les exploiter ceux qui sont béné ?ques ou bien pour mieux s ? en protéger et de les contrôler ceux qui sont pathogènes Le matériel utilisé a Echantillon étudié les colonies apparaissent dans les milieux de culture b Petit matériel anse de platine pipette pasteur la boite contenant les cultures tubes à essai lames papier ?ltre stérile les disques c Gros matériels bec de bunsen bain-marie étuve d Produits l'eau oxygénée d'eau distillée stérile les di ?érents réactifs Classi ?cation phénotypique Depuis la classi ?cation proposée par Cohn en et jusqu'au début des années soixante toute la taxonomie bactérienne reposait sur une classi ?cation phénétique La classi ?cation phénétique ou phénotypique utilise un nombre de caractères considérés comme importants Observations macroscopiques microscopiques - Descriptions des colonies forme taille couleur odeur - la morphologie des cellules bacille coque leurs arrangements - Les colorations Gram bleu méthylène acido-alcoolrésistante - Observation de la mobilité à l ? état frais - On peut également rechercher la présence d ? endospores la croissance aérobie anaérobie Les caractères morphologiques sont utiles pour l ? identi ?cation mais ne peuvent pas démontrer à eux seuls les relations phylogénétiques Les Tests métaboliques Très importants ils peuvent distinguer des bactéries très apparentées On recherche la présence d ? enzymes oxydase catalase la dégradation de l ? urée de l ? esculine La transformation du lactose et la production de gaz l ? utilisation de di ?érents sucres comme source de carbone l ? utilisation du citrate la production d ? acéto? ne Méthode de travail ? Etude des enzymes respiratoires terminales - Recherche de la catalase Principe La catalase est un enzyme ayant la propriété de décomposer le peroxyde d'hydrogène H O avec dégagement d'oxygène Technique Sur une lame et à l ? aide d ? une pipette Pasteur on dépose une colonie bactérienne à laquelle on ajoute de l'eau oxygénée CLecture Catalase e ?ervescence Catalase - pas d'e ?ervescence - Recherche d ? un cytochrome oxydase Principe Ce test permet la détection de la phénylène-diamine-oxydase ou le cytochrome oxydase enzyme entrant dans divers couples d'oxydoréduction Agissant sur un substrat incolore cet enzyme entra? ne la formation d'une semi-quinone rouge Cette dernière très instable s'oxyde rapidement pour donner un composé noir? tre La technique Sur un papier ?ltre stérile déposer un disque d'oxydase imprégné de diméthyl-para-phénylène diamine Humidi ?er le disque avec quelques gouttes d'eau distillée stérile Un excès d'eau peut nuire à la lecture À l'aide d'anse de platine stérile prendre la bactérie à identi ?er culture de - heures et la déposer sur le disque