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La rt pcr Université Cheikh Anta Diop Ecole Supérieure polytechnique Département Génie chimique et Biologie Appliquée ASTOU SAWE FATOU KEBA DIOP DUT IA Année - BIOLOGIE CELLULAIRE CEXPOSE SUR LA RT-PCR CPLAN I HISTORIQUE II PRINCIPE III TECHNOLOGIES DE DE

Université Cheikh Anta Diop Ecole Supérieure polytechnique Département Génie chimique et Biologie Appliquée ASTOU SAWE FATOU KEBA DIOP DUT IA Année - BIOLOGIE CELLULAIRE CEXPOSE SUR LA RT-PCR CPLAN I HISTORIQUE II PRINCIPE III TECHNOLOGIES DE DETECTION IV APPLICATIONS V CONCLUSION CHISTORIQUE ? L ? acronyme RT-PCR signi ?e Reverse Transcriptase PCR soit une PCR après transcription inverse d ? un acide ribonucléique ARN en ADN complémentaire ADNc ? Howard Temin et Satoshi Misutani découvrent en la transcriptase inverse CCependant la RT-PCR a été mis au point pour utiliser les ARN comme matrice d ? ampli ?cation de la PCR Elle est certainement la méthode la plus sensible pour détecter et éventuellement quanti ?er les ARN messagers au niveau d ? un organe d ? un tissu ou d ? une cellule CPRINCIPE ? Le principe de la RT-PCR est basé sur un moyen utilisant l ? ARN pour produire l ? ADNc utilisant la transcriptase inverse RT En e ?et il s ? agit de réaliser une succession de réactions de réplication d ? une matrice double brin d ? ADN L ? ADN est généralement destiné à être ampli ?é par PCR Cependant l ? ADNc étant plus stable permet plus de liberté que les ARN pour les analyses suivantes CTECHNOLOGIES DE DETECTION ? La technique RT-PCR est très utile en raison de sa haute sensibilité aux faibles quantités d ? ARN d ? entrée Il existe di ?érents types d ? amorces qui peuvent être utilisées pour ce processus les amorces Oligo dT les amorces aléatoires ou les amorces spéci ?ques au gène Les amorces utilisées peuvent cibler un transcrit d ? ARNm connu qui conduira à la détection d ? un transcrit souhaité ou simplement transcrire le pro ?l d ? ARN entier On notera di ?érentes techniques que sont ? La RT-PCR en une étape ? La RT-PCR in situ ? La RT-PCR quantitative CLa RT-PCR en une étape CLa RT-PCR quantitative CAPPLICATIONS L ? expression génique spéci ?que d ? un tissu peut être déterminée par la PCR à transcription inverse LA RT-PCR est applicable dans le suivi du pronostic et de la réponse thérapeutique chez les patients cancéreux De plus le gène mutant et son expression dans un tissu particulier peuvent être déterminés en utilisant cette méthode IL est utilisé dans les études d ? insertion de gènes La maladie héréditaire peut également être diagnostiquée en utilisant la RT-PCR CCONCLUSION En dé ?nitive la RT-PCR nous permet de synthétiser le brin complémentaire d ? un ADN avec des désoxyribonucléotides en utilisant un ADN polymérase à travers di ?érentes techniques de détection Cependant l ? une des di ?cultés de cette méthode concerne la préparation des ARN qui peuvent être très facilement dégradés et contaminés par de l ? ADN génomique CFin de l ? exposé C