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Protocole bsa palmitate en melange 1

I Préparation de la solution BSA de palmitate de sodiumPalmitate de sodium mM solution de BSA mM rapport molaire palmitate BSA Remarque Le maintien de températures spéci ?ques pour toutes les solutions est essentiel pour obtenir une conjugaison de qualité Eau chaude de ml d'eau du robinet dans deux béchers séparés L maintenus dans un bain d'eau de C Réchau ?er un bêcher de ml avec une barre d'agitation dans un incubateur de C Préparez ml d'une solution de NaCl mM en ajoutant ml de stock M à ml de dH O II Préparation de la solution BSA ml Note La moitié de la solution de BSA préparée est conjuguée avec le palmitate de sodium la moitié restante est utilisée pour préparer les di ?erentes parties pour le véhicule témoin Peser g BSA sans acides gras Ajouter ml de solution de NaCl mM dans le bécher préchau ?é de ml avec une barre d'agitation et placer sur une plaque d'agitation Ajouter la BSA au bécher en remuant constamment Placez un bécher pré-réchau ?é L avec de l'eau du robinet sur une plaque d'agitation chau ?ée et placez un thermomètre dans le bain d'eau Couvrir le bécher contenant la solution de BSA avec para ?lm et la placer dans le bain marie L Réglez la chaleur au besoin pour maintenir la température à environ C mais pas supérieure à C Remuer jusqu'à ce que la BSA soit complètement dissoute Transférer la solution BSA dans la chambre d'une unité de ml dans une hotte laminaire Filtrer avec un aspirateur Transférer ml de la BSA ?ltrée dans un bécher préchau ?é de ml la couvrir avec para ?lm et la placer dans le bain d'eau reprendre l'agitation Diluer la solution de BSA restante avec ml de solution de NaCl mM pour obtenir mM Aliquote dans des acons de verre de mL et congéler à - C pour une utilisation ultérieure comme contrôle du véhicule III Préparation de la solution Palmitate C Pendant que la BSA est agitée dans le bain-marie peser mg de palmitate de sodium et l'ajouter à ml d'une solution de NaCl mM dans un Erlenmeyer de ml avec une barre d'agitation Couvrez l'erlenmeyer avec para ?lm et faites-le peser Placez l'autre bécher pré-réchau ?é L avec de l'eau du robinet sur une plaque d'agitation chau ?ée et placez le thermomètre dans le bain-marie Placez l'erlenmeyer av le palmitate dans le bain d'eau et chau ?ez à C tout en remuant Remarque La solution Palmitate peut devenir trouble entre - C Il deviendra clair car il atteint près de C IV Conjugating Palmitate and BSA Retirez le para ?lm du bécher avec BSA et de l'erlenmeyer av palmitate Transférer ml de la solution de Palmitate à C dans la solution BSA tout en agitant à C transférer mL à la fois de palmitate dans une pipette de ml aspirer et distribuer rapidement Couvrez le bécher avec para ?lm Mélanger à C pendant heure surveiller la température du bain d'eau pour garder