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Solution tampon TD TP h Préparation d ? une solution tampon en enzymologie I Quelques dé ?nitions En chimie une solution tampon est une solution qui maintient approximativement le même pH malgré l'addition de petites quantités d'un acide ou d'une base ou

TD TP h Préparation d ? une solution tampon en enzymologie I Quelques dé ?nitions En chimie une solution tampon est une solution qui maintient approximativement le même pH malgré l'addition de petites quantités d'un acide ou d'une base ou malgré une dilution Une solution tampon est composée ? soit d'un acide faible HA et de son anion A ?? Il s'agit par exemple du couple CH COOH CH COO ?? ou encore du couple NH NH ? soit d'une base faible B et de son cation BH On trouve dans le sang humain une solution tampon physiologique formée par le couple H CO HCO - qui maintient le pH sanguin entre et On évalue la capacité d'une solution tampon à lutter contre les changements de pH par le pouvoir tampon noté PT ou encore Le pouvoir tampon maximal d'une solution est obtenu pour un mélange équimolaire entre par exemple l'acide faible HA et son anion correspondant A ?? Dans ce cas le pH est égal à la valeur du pKa du couple en solution Une solution tampon est obtenue parle mélange en quantité du même ordre d ? un acide faible et de base conjuguée de façon à se trouver autour de pH pKa Les enzymes ont besoin de travailler dans des milieux tampons comme le corps humain ou in vitro avec des solutions tampons L ? activité d ? une préparation enzymatique est exprimée en nanokatals II L'enzyme à étudier dans les futurs TP L ? enzyme étudiée est la Béta Galactosidase dont on suit son action sur un substrat de synthèse l ? orthonitrophényl-B ??D-galactopyrannoside oNPG PM à la concentration de g L- dans le tampon standard TS à pH Ph A Biotechnologies education CIII Application préparation d ? une solution tampon en enzymologie Comment faire Préparer ml de phosphate monobasique à mM A partir d ? une solution phosphate monobasique anhydre de PM g mol Il faut peser g et ajuster ? ? ? ? ? ? ? ? Préparer ml de tampon phosphate TS pour enzymologie à mM Il faut peser g et ajuster ? ? ? ? ? ? ? ? ? Il faut prendre les ml de solution phosphate dibasique à mM et ajuster le pH à en rajoutant quelques gouttes de la solution précédente Cf explication de l ? enseignant Le matériel à utiliser Verrerie béchers de et ml pH mètre Solution à pH et pH Agitateur Burette Ph A Biotechnologies education C