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Cours diagnostic patho hb Diagnostic biologique des pathologies génétiques de l'hémoglobine Frédéric Girard Lycée Docteur Lacroix - Narbonne Phase pré-analytique La phase pré-analytique d'une étude de l'hémoglobine au laboratoire suppose de conna? tre le

Diagnostic biologique des pathologies génétiques de l'hémoglobine Frédéric Girard Lycée Docteur Lacroix - Narbonne Phase pré-analytique La phase pré-analytique d'une étude de l'hémoglobine au laboratoire suppose de conna? tre le contexte de la demande dépistage systématique chez un sujet à risque enquête familiale suite à la mise en évidence d'une pathologie génétique de l'hémoglobine diagnostic étiologique d'anomalies hématologiques anémie hémolytique microcytose pseudo-globulie etc ? Les données doivent également préciser l'origine ethnique du patient Toute étude de l'hémoglobine comporte aussi le recueil des données biologiques suivantes hémogramme réticulocytose sidérémie capacité totale de ?xation de la transferrine ferritinémie Prélèvement Le prélèvement est recueilli sur un anticoagulant héparine citrate ou EDTA Il est conservé en sang total à C Le délai de conservation ne doit pas excéder une semaine en raison de l'apparition de fractions dénaturées dans le prélèvement ainsi que la dégradation de certaines fractions comme l'hémoglobine f ?tale La recherche d'hémoglobines à l'état de trace ne peut par ailleurs se faire que sur un échantillon frais c'est le cas de l'hémoglobine Bart ?? ?? présente chez les nouveaux-nés atteints d' ??-thalassémie majeure Techniques électrophorétiques d'étude de l'hémoglobine Dans la plupart des laboratoires l'analyse de référence est l'électrophorèse de zone à pH alcalin pH sur acétate de cellulose Elle est le premier élément d'orientation pour une exploration plus spécialisée et est le prélude à la demande d'examens complémentaires nécessaires à l'interprétation de pro ?ls électrophorétiques anormaux Les principaux examens complémentaires sont l'électrophorèse sur citrate agar à pH acide pH l'isoélectrofocalisation le test d'Itano le test de falciformation Dans un petit nombre de cas l'identi ?cation d'un mutant rare nécessite des techniques plus complexes électrophorèse des cha? nes d'hémoglobine spectrométrie de masse ? relevant de laboratoires spécialisés Les techniques de quanti ?cation dépendent des fractions à étudier Le dosage de l'HbA fait appel à des tehcniques chromatographiques et doit pouvoir être rendu avec une précision de Le dosage de l'HbF est réalisé par la méthode biochimique de dénaturation alcaline de Betke modi ?ée par Pembrey Cette méthode est performante pour des taux d'HbF inférieurs à Électrophorèse de zone à pH alcalin pH L'électrophorèse à pH alcalin est réalisée sur acétate de cellulose à pH HbA HbC HbS HbE HbD HbF HbA HbH Électrophorégramme sur acétate de cellulose pH Origine L'HbS migre entre l'HbA et l'HbA mais plus de variants ont été décrits qui migrent au même endroit que l'HbS hémoglobines anormales appartenant au groupe des hémoglobines D G et P L'HbS de loin la plus fréquente devra être identi ?ée par le test d'Itano o? elle est la seule à précipiter en milieu réducteur Ces résultats peuvent être con ?rmé par l'électrophorèse en citrate-agar à pH acide o? l'HbS présente une migration spéci ?que A ?rmer la présence d'HbS permet aussi de poser le diagnostic de drépanocytose hétérozygote si elle est retrouvée en même temps que l'HbA ou homozygote si elle est le seul constituant majeur Dans ce dernier cas l'HbF peut être augmentée dans des proportions variables CLes hémoglobines HbC et HbE